厄貝沙坦對心肌缺血大鼠室性心律失常發(fā)生及縫隙連接蛋白Cx43表達(dá)影響的研究.pdf

1、缺血性心臟病引起的心律失常，尤其是室性心律失常（包括室性早搏、室速和室顫）是導(dǎo)致患者猝死的主要原因之一。研究認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)存在著大量的氧自由基、鈣超載以及酸性物質(zhì)，而室性心律失常是一種多種機制共同作用的過程。通過大量的研究發(fā)現(xiàn)，縫隙連接改變和許多病理生理變化有著聯(lián)系，并且縫隙連接的改變和心律失常有著重要的聯(lián)系。學(xué)者們把和心律失常有關(guān)的縫隙連接改變稱為縫隙連接重構(gòu)?？p隙連接是細(xì)胞間進(jìn)行信息通訊以及物質(zhì)交換的重要途徑，對多細(xì)胞生命體有著重要的作

2、用。心室肌細(xì)胞閏盤內(nèi)縫隙連接的重要連接蛋白為Connexin43(Cx43)，很多研究者通過實驗發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)表達(dá)與分布的異常與心律失常發(fā)生有關(guān)。因此，研究心肌缺血時Cx43表達(dá)是否異常，對缺血后發(fā)生心律失常的作用機制可提供重要的理論依據(jù)，為臨床上治療缺血后心律失常起指導(dǎo)作用。
　　第一部分：厄貝沙坦作用后大鼠缺血心肌室性心律失常的發(fā)生及縫隙蛋白Cx43表達(dá)
　　目的：
　　探討大鼠心肌缺血時室性心律失常的發(fā)生，并檢測心肌

3、縫隙連接蛋白 Cx43的表達(dá)。探討大鼠心肌缺血時厄貝沙坦對心肌 Cx43表達(dá)及室性心律失常發(fā)生的作用。
　　方法：
　　1、實驗分組：隨機選取40只SD大鼠，分為四組，每組10只，對照組(即假手術(shù)組：只行開胸術(shù)，而不造成心肌梗死)、陳舊性心肌梗死組、厄貝沙坦組、陳舊性心肌梗死+厄貝沙坦組。
　　2、大鼠心肌梗死模型的構(gòu)建：大鼠麻醉后，給予呼吸機輔助呼吸，在左心第二部分：厄貝沙坦可逆轉(zhuǎn)特異性低表達(dá)縫隙蛋白Cx43而增加的

4、大鼠室性心律失常發(fā)生
　　目的：
　　探討厄貝沙坦可逆轉(zhuǎn)特異性低表達(dá)縫隙蛋白Cx43而增加的大鼠室性心律失常發(fā)生。
　　方法：
　　1、降低Cx43表達(dá)水平(Cx43基因的沉默作用）
　　2、大鼠分為4組，包括對照組，厄貝沙坦組，注射慢病毒組即低表達(dá)組，以及注射慢病毒+厄貝沙坦。慢病毒注射至心臟邊緣區(qū)。病毒注射含量為1*1011病毒數(shù)。造模結(jié)束后1)取各組心臟組織分離心肌細(xì)胞檢測心肌細(xì)胞的MTT；2)取心臟

5、組織制成切片檢測心肌細(xì)胞的凋亡；3)取心臟組織進(jìn)行Cx43的WB檢測;4)Cx43與室性心律失常：通過連續(xù)心電圖監(jiān)測4周，對比Cx43表達(dá)降低大鼠與正常大鼠室性心律失常的發(fā)生次數(shù)，闡明Cx43與室性心律失常的關(guān)系。加用厄貝沙坦治療后，觀察室性心律失常發(fā)生。
　　結(jié)果：
　　1．通過ShRNA慢病毒載體介導(dǎo)使SD大鼠心肌細(xì)胞Cx43基因沉默，從而降低Cx43表達(dá)水平。
　　2. Cx43表達(dá)水平降低的大鼠心肌細(xì)胞較正常大