心肌縫隙連接蛋白43在擬交感心房顫動模型中表達水平及分布變化的研究.pdf

1、目的:本課題旨在通過建立擬交感心房顫動模型，研究心房縫隙連接蛋白43(Cx43)表達水平及分布的變化，從而探討交感性房顫發(fā)生與維持的可能的內在機制。
　　方法:建立交感性心房顫動模型，健康幼犬15只，雌雄不分，將其隨機分成3組，每組5只，分別為:1.對照組（Control組），將實驗犬心臟取出后，快速連接至langendorff心臟離體灌流儀，予臺氏液灌流，持續(xù)約1h?？焖傩姆科鸩M（RAP組），灌流方法同Control組，僅在灌

2、流時用電生理刺激儀以800次/min頻率起搏30s，共30次。異丙腎上腺素灌流組+快速心房起搏組(ISO+RAP組)，以含0.1 umol/L異丙腎上腺素(ISO)的改良臺氏液灌流心臟，余同RAP組。①在離體灌流狀態(tài)下，通過快速心房起搏構建擬交感性房顫模型。各組分別測量心房有效不應期(AERP)和記錄各組的房顫誘發(fā)率的情況。實驗結束后，取左心房組織固定，通過免疫組化檢測心房神經生長因子(NGF)和酪氨酸羥化酶(TH)的表達和分布變化。觀

3、察擬交感效應對快速起搏離體心臟的影響。②取部分左心房組織，采用western blotting方法檢測各組心房肌中總Cx43的含量及磷酸化Cx43的含量，Q-PCR檢測Cx43mRNA表達量，免疫熒光(IF)檢測心房肌組織Cx43的分布變化，凋亡試劑盒檢測心房肌組織的細胞凋亡率，透射電鏡檢測心房肌線粒體形態(tài)的變化，熒光比色法檢測心房肌線粒體ROS的生成量。
　　結果:
　　①各組所測得的AERP中，Control組和RAP組

4、無顯著差別，ISO+RAP組AERP則顯著縮短; ISO+RAP組可成功誘發(fā)房顫，而Control組及RAP組均無法誘發(fā)房顫;與Control組比較，RAP組及ISO+RAP組NGF和TH的含量及分布均增多，ISO+RAP組高于RAP組。
　?、谂cControl組比較，RAP組及ISO+RAP組Cx43及磷酸化Cx43含量呈逐漸降低趨勢;與Control組比較，RAP組Cx43分布呈明顯側向化，線粒體輕度腫脹，基質完整，ISO+R

5、AP組Cx43呈點狀散在分布，線粒體明顯腫脹，部分基質透明; ISO+ RAP組細胞凋亡指數(shù)(AI)及線粒體ROS生成量均顯著高于RAP組及Control組，而RAP組則高于Control組。
　　結論:
　　1.通過異丙腎上腺素灌流模擬交感神經興奮效應，可以顯著縮短心房肌的動作電位時程，表現(xiàn)為AERP時程縮短。
　　2.單純的高頻心房起搏在本實驗持續(xù)的時間內無法誘發(fā)房顫，而在擬交感效應下則可以成功誘發(fā)，成功構建擬交感