富自體生長因子纖維蛋白液體對兔皮膚手術(shù)切口愈合的影響.pdf

1、目的:
　　如何能夠最大限度減少瘢痕形成、提高手術(shù)切口愈合質(zhì)量是現(xiàn)代創(chuàng)傷修復(fù)的研究熱點(diǎn)。皮膚傷口愈合是繁雜而有序的生物學(xué)過程，各種生長因子在其中發(fā)揮重要作用。來自于自體靜脈血的富自體生長因子纖維蛋白（Concentrated Growth Factors，CGF）由于其含有大量、多種生長因子，在組織創(chuàng)傷修復(fù)中發(fā)揮著重要作用。本研究通過于新西蘭大耳白兔皮膚切口邊緣注射富自體生長因子纖維蛋白液體，應(yīng)用組織病理學(xué)及形態(tài)計(jì)量學(xué)方法，探討C

2、GF液體對皮膚切口愈合的影響，為CGF液體在臨床上應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
　　雄性新西蘭大白兔12只，12周齡，體重2.5 kg-2.8 kg。實(shí)驗(yàn)采用自身對照設(shè)計(jì)，每只動(dòng)物背部6個(gè)切口，按手術(shù)切口處理分為3組:A組:(CGF2次組)中部切口，術(shù)后注射CGF2次;B組:（CGF1次組）前部切口，術(shù)后注射CGF1次;C組:（空白對照組）后部切口，術(shù)后不做任何處理。共72個(gè)切口。
　　

3、2、富自體生長因子纖維蛋白液體制備
　　術(shù)前于兔耳緣靜脈穿刺，以9 ml專門用于制取富自體生長因子纖維蛋白液體的真空負(fù)壓采血管采取動(dòng)物靜脈血約9 ml，制備富自體生長因子纖維蛋白液體，5 ml粘膜注射針吸取離心管中段約4 ml富自體生長因子纖維蛋白液體備用。
　　3、手術(shù)過程
　　全麻下于動(dòng)物脊柱兩側(cè)旁開2 cm處，平行脊柱做6個(gè)長約2 cm皮膚切口，前、中、后切口間間隔2 cm。切開皮膚、皮下組織，深達(dá)肌層。A組、B

4、組切口縫合前于切口兩側(cè)創(chuàng)緣旁1mm處皮下注射CGF液1 ml,間斷縫合切口;C組:切口不作處理，直接間斷縫合。A組術(shù)后1周，制備CGF液體，同法再次注射。術(shù)后抗感染治療。一周后拆除縫合線。
　　4、標(biāo)本采集及處理
　　分別于術(shù)后1周、2周、3周、4周，隨機(jī)抽取3只動(dòng)物，全麻下距切口兩側(cè)各0.5 cm，切取2×1 cm2全層皮膚及皮下組織，立即置入10％甲醛溶液固定。
　　5、大體觀察
　　分別于術(shù)后1、2、3、4

5、周，動(dòng)物標(biāo)本采集前觀察傷口情況并記錄。
　　6、HE染色組織學(xué)觀察
　　分別于術(shù)后1、2、3、4周，10％甲醛溶液固定的組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下組織學(xué)觀察:真皮層，表皮層及切口兩側(cè)炎細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膠原的情況
　　7、苦味酸-天狼星紅染色組織學(xué)觀察
　　分別于術(shù)后1、2、3、4周，10％甲醛溶液固定的組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋切片，苦味酸-天狼星紅染色，偏振光顯微鏡下觀察:切口兩側(cè)膠原纖維形成情

6、況。采用Image Pro-Plus6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)對創(chuàng)口皮膚中總膠原含量，Ⅰ/Ⅲ型膠原比例進(jìn)行測定。
　　8、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（(x)±s），SNK-q檢驗(yàn)組間兩兩比較，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、大體觀察
　　術(shù)后1周，A組、B組:傷口愈合良好，表面清潔，部分縫線脫落，輕微縫線反應(yīng);C組:部分傷口表面有結(jié)痂覆蓋

7、，部分縫線脫落，傷口處皮膚顏色發(fā)紅，部分傷口縫線反應(yīng)較重。
　　術(shù)后2周，A組，傷口愈合良好，平整，與周圍組織界限不清;B組傷口稍凹陷;C組傷口凹陷，愈合線明顯，與周圍正常組織界限清晰。
　　術(shù)后3周、4周，A組、B組:切口線細(xì)膩不清晰;C組:切口線處無毛發(fā)生長，愈合線仍較清晰可見。
　　2、光鏡觀察
　　2.1 HE染色組織學(xué)觀察
　　術(shù)后1周，A組、B組:皮膚全層愈合，表皮層角化不明顯，棘細(xì)胞層未見明顯

8、增生，基底層完整，基底細(xì)胞排列整齊，成纖維細(xì)胞排列疏松較規(guī)則，胞體較大，核仁圓形，少量炎細(xì)胞浸潤;C組:角化明顯，棘細(xì)胞層增生，真皮未完全愈合，成纖維細(xì)胞胞體較小，可見炎細(xì)胞浸潤。
　　術(shù)后2周，A、B、C3組皮膚全層均已愈合。A組，表皮層基本平坦，與周圍正常組織相近，成纖維細(xì)胞數(shù)量多，核仁較大，形成纖維束細(xì)小，與切口線近平行，向周圍正常組織膠原排列移形，愈合線變窄;B組，表皮稍凹陷，角化不重，新生膠原束較細(xì)小，排列相對疏松，緊鄰

9、表皮層處排列接近正常組織，成纖維細(xì)胞相對密集;C組，表皮有凹陷，角化明顯，新生膠原顏色較淡，與愈合線呈垂直排列，有炎細(xì)胞浸潤。
　　術(shù)后3周、4周，A組，B組，成纖維細(xì)胞數(shù)量減少，膠原排列與周圍正常組織相近;C組，角化較重，膠原排列成束，致密。
　　2.2膠原纖維苦味酸-天狼星紅染色組織學(xué)觀察
　　術(shù)后1周，A組、B組，切口兩側(cè)新生膠原以綠色細(xì)小Ⅲ型膠原為主;C組切口兩側(cè)紅黃色Ⅰ型膠原相對較多，黑色區(qū)域較多。
　

10、　術(shù)后2周，A組切口周圍可見大量綠色Ⅲ型膠原;B組綠色Ⅲ型膠原相對較少;C組以紅黃色Ⅰ型膠原為主。
　　術(shù)后3周、4周，A組、B組以綠色Ⅲ型膠原為主，膠原排列接近正常組織，膠原束細(xì)小;C組，切口兩側(cè)可見紅黃色Ⅰ型膠原，排列紊亂。
　　3、膠原纖維定量分析結(jié)果
　　3.1總膠原含量比較（以(x)±s表示）
　　術(shù)后1周，A組:62.97±1.29;B組:62.97±1.21;C組:56.34±1.31。A組與C組，

11、B組與C組總膠原含量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），A組與B組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　術(shù)后2周，A組:70.90±1.26;B組:69.80±1.29;C組:67.26±0.72。A組B組C組三組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　術(shù)后3周、4周，C組＞B組＞A組，A、B、C三組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　3.2Ⅰ/Ⅲ型膠原纖維比值比較（以(x)±s表示）
　　術(shù)后1周，A

12、組:0.245±0.084;B組0.245±0.085;C組:0.399±0.081。A組與C組，B組與C組Ⅰ/Ⅲ型膠原纖維比值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;A組與B組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　術(shù)后2、3、4周，C組＞A組＞B組，A組B組C組三組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、CGF液體可促進(jìn)手術(shù)切口愈合，減輕炎癥反應(yīng)。
　　2、CGF液體在創(chuàng)傷早期可增加手術(shù)切口局部