富自體濃縮生長因子纖維蛋白提取液對MC3T3-E1成骨細胞影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過制取富自體濃縮生長因子纖維蛋白（concentrated growth factors，CGF）提取液，觀察其對MC3T3-E1成骨細胞增殖、分化的影響，為臨床應(yīng)用CGF提供相應(yīng)的實驗依據(jù)。
　　方法：
　?。?）將收集于志愿者的血液通過Medifuge離心加速機制備CGF，再采用冷凍聯(lián)合37℃孵育的方法制取 CGF提取液。
　?。?）實驗組采用濃度分別為5％、10%、20%的CGF條件培養(yǎng)基（含10%FBS

2、，1%雙抗），對照組采用α-MEM完全培養(yǎng)基（含10%FBS，1%雙抗）培養(yǎng)MC3T3-E1成骨細胞，培養(yǎng)1、3、5、7天后CCK-8法檢測細胞增殖情況，確定CGF提取液的最佳使用濃度，應(yīng)用于后續(xù)實驗。
　　（3）實驗組使用CGF條件培養(yǎng)基，對照組使用α-MEM完全培養(yǎng)基，分別在第1、3、5、7天時，進行堿性磷酸酶（ALP）活性檢測；在第3、7天時，實時熒光定量PCR（RT-PCR或qPCR）測定 MC3T3-E1成骨細胞中 Ru

3、nt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-2（Runt-related transcription factor-2，Runx2）和成骨細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子（Osterix，Osx）基因的表達情況。
　　結(jié)果：
　?。?）按照CGF標(biāo)準化制備程序，能成功將血液分成明顯的三層結(jié)構(gòu)，形成體積較大、柔軟、韌性強的CGF凝膠。
　?。?）在分別培養(yǎng)1、3、5、7天，CCK-8法測得各濃度的CGF條件培養(yǎng)基的吸光度值（OD）均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義

4、（P＜0.05）；比較三種濃度CGF條件培養(yǎng)基的效果，10%CGF組在各個時間點促細胞增殖的作用均強于5%CGF、20%CGF組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　?。?）ALP檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組和對照組的吸光度值均隨著時間延長而逐漸增加（P＜0.05），在第1天時兩組吸光度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但分別在第3、5、7天時，實驗組的吸光度值均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；兩組MC3T3-E

5、1成骨細胞中Runx2和Osx的基因表達量都隨著實驗時間的延長逐漸增加（P<0.05），且在各個時間點，實驗組Runx2和Osx的基因表達水平均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）CGF提取液可促進MC3T3-E1成骨細胞增殖，但濃度為10%的CGF提取液促進細胞增殖的效果最明顯。
　?。?）CGF提取液中的生長因子能夠增加MC3T3-E1成骨細胞的堿性磷酸酶活性，促進細胞分化成熟