新的丁內(nèi)酯衍生物對血管形成的影響及其作用機制研究.pdf

1、血管生成在生理過程(如胚胎發(fā)育)和病理過程(如腫瘤生長、動脈粥樣硬化)中都起到關(guān)鍵作用。血管形成是一個多種細胞因子和多種細胞成分參與的，動態(tài)、協(xié)調(diào)的復(fù)雜過程，有多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與，包括：內(nèi)皮細胞的增殖、存活、凋亡、細胞外基質(zhì)降解、遷移、分化和形態(tài)發(fā)生等。其中抑制血管內(nèi)皮細胞凋亡(VEC)令其存活被認為是血管發(fā)生的關(guān)鍵機制。 我們以前研究發(fā)現(xiàn)，一種新型的丁內(nèi)酯衍生物，3-芐基-5-(2-硝基苯氧甲基-γ-丁內(nèi)酯(3BDO)能夠

2、有效抑制去血清和生長因子誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞凋亡。本論文從化學遺傳學的角度，研究了3BDO在調(diào)節(jié)血管形成中的作用及其可能作用的機制。 研究方法： 1.人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)和人臍動脈平滑肌細胞(VSMCs)的分離和培養(yǎng)，參考[Jaffe et al，1973；Leik et al，2004]. 2.大鼠主動脈環(huán)培養(yǎng)，參考[Nicosia & Ottinetti，1990]3.體外血管形成檢測：Mat

3、rigel方法，參考[Kureishi Y et al，2000]4.體外細胞遷移檢測：平面單層細胞損傷愈合實驗，結(jié)合倒置相差顯微鏡觀察，參考[Bürk，1973；Vasvari et al，2007]5.倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化6.吖啶橙染色結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡觀察，檢測細胞核變化7.MTT法檢測細胞生長率8.Na+K+-ATP酶活性檢測試劑盒檢測Na+K+－ATP酶活性9.線粒體膜電位(MMP)檢測：利用熒光探針(TMR

4、M)并結(jié)合激光掃描共聚焦顯微術(shù)檢測，參考[Falchi et al，2005]研究結(jié)果1.大鼠主動脈環(huán)血管形成實驗顯示，120μM 3BDO對VECs和VSMCs具有選擇性的作用。 2.體外Matrigel毛細血管樣結(jié)構(gòu)形成實驗顯示，在去除血清和FGF-2的條件下，120μM 3BDO處理HUVECs48小時，HUVECs在Matrigel上形成毛細血管樣結(jié)構(gòu)。 3.單層細胞損傷愈合實驗顯示，120μM 3BDO處理

5、HUVECs24小時，HUVECs仍能維持其遷移能力。 4.AO染色結(jié)合熒光顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)，120μM 3BDO處理VSMCs24小時，細胞核仍保持完整；MTT結(jié)果顯示120μM 3BDO處理VSMCs24小時，與對照組相比，VSMCs的生長顯著被抑制；單層細胞損傷愈合實驗顯示，12μM 3BDO處理VSMCsl8小時，VSMCs遷移能力顯著降低。 5.用120μM 3BDO處理HUVECs 24小時，與對照組相比，

6、HUVECs的Na+K+-ATP酶活性顯著性降低；但是120μM 3BDO處理VSMCs24小時，其Na+K+-ATP酶活性沒有明顯變化。 6.用120μM 3BDO處理HUVECs24小時，與對照組相比，其線粒體膜電位沒有明顯變化；但是120μM 3BDO處理VSMCs24小時，VSMCs的線粒體膜電位顯著性降低。 結(jié)論： 1.在調(diào)節(jié)血管形成中，3BDO對VECs和VSMCs具有選擇性的作用。