新的丁內(nèi)酯衍生物對(duì)血管形成的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、血管生成在生理過(guò)程(如胚胎發(fā)育)和病理過(guò)程(如腫瘤生長(zhǎng)、動(dòng)脈粥樣硬化)中都起到關(guān)鍵作用。血管形成是一個(gè)多種細(xì)胞因子和多種細(xì)胞成分參與的，動(dòng)態(tài)、協(xié)調(diào)的復(fù)雜過(guò)程，有多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與，包括：內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、存活、凋亡、細(xì)胞外基質(zhì)降解、遷移、分化和形態(tài)發(fā)生等。其中抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡(VEC)令其存活被認(rèn)為是血管發(fā)生的關(guān)鍵機(jī)制。 我們以前研究發(fā)現(xiàn)，一種新型的丁內(nèi)酯衍生物，3-芐基-5-(2-硝基苯氧甲基-γ-丁內(nèi)酯(3BDO)能夠

2、有效抑制去血清和生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。本論文從化學(xué)遺傳學(xué)的角度，研究了3BDO在調(diào)節(jié)血管形成中的作用及其可能作用的機(jī)制。 研究方法： 1.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)和人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(VSMCs)的分離和培養(yǎng)，參考[Jaffe et al，1973；Leik et al，2004]. 2.大鼠主動(dòng)脈環(huán)培養(yǎng)，參考[Nicosia & Ottinetti，1990]3.體外血管形成檢測(cè)：Mat

3、rigel方法，參考[Kureishi Y et al，2000]4.體外細(xì)胞遷移檢測(cè)：平面單層細(xì)胞損傷愈合實(shí)驗(yàn)，結(jié)合倒置相差顯微鏡觀察，參考[Bürk，1973；Vasvari et al，2007]5.倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化6.吖啶橙染色結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡觀察，檢測(cè)細(xì)胞核變化7.MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)率8.Na+K+-ATP酶活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)Na+K+－ATP酶活性9.線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)：利用熒光探針(TMR

4、M)并結(jié)合激光掃描共聚焦顯微術(shù)檢測(cè)，參考[Falchi et al，2005]研究結(jié)果1.大鼠主動(dòng)脈環(huán)血管形成實(shí)驗(yàn)顯示，120μM 3BDO對(duì)VECs和VSMCs具有選擇性的作用。 2.體外Matrigel毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)形成實(shí)驗(yàn)顯示，在去除血清和FGF-2的條件下，120μM 3BDO處理HUVECs48小時(shí)，HUVECs在Matrigel上形成毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)。 3.單層細(xì)胞損傷愈合實(shí)驗(yàn)顯示，120μM 3BDO處理

5、HUVECs24小時(shí)，HUVECs仍能維持其遷移能力。 4.AO染色結(jié)合熒光顯微鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，120μM 3BDO處理VSMCs24小時(shí)，細(xì)胞核仍保持完整；MTT結(jié)果顯示120μM 3BDO處理VSMCs24小時(shí)，與對(duì)照組相比，VSMCs的生長(zhǎng)顯著被抑制；單層細(xì)胞損傷愈合實(shí)驗(yàn)顯示，12μM 3BDO處理VSMCsl8小時(shí)，VSMCs遷移能力顯著降低。 5.用120μM 3BDO處理HUVECs 24小時(shí)，與對(duì)照組相比，

6、HUVECs的Na+K+-ATP酶活性顯著性降低；但是120μM 3BDO處理VSMCs24小時(shí)，其Na+K+-ATP酶活性沒(méi)有明顯變化。 6.用120μM 3BDO處理HUVECs24小時(shí)，與對(duì)照組相比，其線粒體膜電位沒(méi)有明顯變化；但是120μM 3BDO處理VSMCs24小時(shí)，VSMCs的線粒體膜電位顯著性降低。 結(jié)論： 1.在調(diào)節(jié)血管形成中，3BDO對(duì)VECs和VSMCs具有選擇性的作用。