GSTM潛抑制劑對耐順鉑腫瘤細胞體內(nèi)外增敏作用.pdf

1、惡性腫瘤對人體的健康存在嚴(yán)重危害。惡性腫瘤常用的治療方式為化療。順鉑是肺癌、卵巢癌的一線化療藥物。這些腫瘤對順鉑耐藥往往導(dǎo)致治療失敗。在順鉑耐藥的多種機制中，以GST過表達介導(dǎo)的腫瘤耐藥機制普遍存在于耐藥腫瘤細胞中。為解決順鉑化療耐藥這一大難題，以GST為靶點設(shè)計低毒高效的腫腫瘤耐藥增敏劑并試圖用于臨床勢在必行。
　　本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，自主合成的芳香酰胺類高同工酶選擇性GSTM抑制劑EBEA對卵巢癌耐藥細胞SKOV3/DDP,

2、COC1/DDP具有明顯的增敏作用。在此基礎(chǔ)上，本文檢測了EBEA同系列化合物對耐順鉑細胞的增敏作用，發(fā)現(xiàn)EDEA對卵巢癌細胞SKOV3/DDP，肺癌A549/DDP具有明顯增敏作用，構(gòu)建其移植瘤模型，發(fā)現(xiàn)EDEA與順鉑聯(lián)用對移植瘤生長具有抑制作用。EDEA對卵巢癌細胞COC1/DDP具有潛在抗腫瘤作用。以下是本研究運用到的方法，以及結(jié)果結(jié)論：
　　CCK-8細胞增殖凋亡實驗檢測EDEA對正常細胞HEK293、LO2毒性作用，低毒

3、劑量均為1μM；還檢測了對各腫瘤細胞株：SKOV3,SKOV3/DDP,COC1,COC1/DDP，A549,A549/DDP的毒性作用，在低毒劑量下，測定EDEA對SKOV3/DDP,A549/DDP增敏作用，發(fā)現(xiàn)2μM的EDEA對SKOV3/DDP，A549/DDP增敏3倍左右。
　　用流式細胞術(shù)檢測了不同的耐藥細胞株經(jīng)藥物處理后細胞凋亡情況，在正常細胞耐受的EDEA濃度下，EDEA與低濃度順鉑聯(lián)用，與對照組相比細胞凋亡率增加

4、。
　　Western-blot檢測細胞內(nèi)Caspase-3、Bcl-xL、Bak、Bax和Bcl-2表達。發(fā)現(xiàn)一定濃度EDEA作用后，耐藥細胞對DDP敏感性增加，Western-blot檢測顯示抑制劑與低濃度的DDP協(xié)同作用于耐藥細胞時，Bcl-2家族中促進凋亡的蛋白表達量增加，而抑制凋亡的蛋白表達減少。
　　用皮下成瘤的方法構(gòu)建了裸鼠移植瘤模型，觀察EDEA與順鉑聯(lián)用治療腫瘤的效果。將SKOV3/DDP,A549/DDP

5、細胞復(fù)蘇培養(yǎng)，將其以1×107/site接種于Balb/C裸鼠背部皮下，建立人卵巢癌耐藥動物模型和人非小細胞肺癌耐藥動物模型。隨機分為4組，溶劑組給予含0.2%吐溫80和1%DMSO生理鹽水，DDP組給予順鉑，EDEA組給予雙依他尼酰乙二胺，聯(lián)用組同時給予順鉑DDP和依他尼酰乙二胺EDEA，腹腔注射，每3/4天給藥1次，共6/8次，觀察各組成瘤情況，腫瘤生長情況，以及不同處理組對裸鼠體重，裸鼠的食欲精神狀態(tài)。整個過程測量腫瘤瘤體積變化，

6、制作腫瘤生長曲線，治療結(jié)束后，處死，取瘤，稱重，HE染色，TUNEL法檢測腫瘤細胞的凋亡率，免疫組化檢測CD31表達，Ki67表達。我們發(fā)現(xiàn)SKOV3/DDP模型鼠在第三次給藥后聯(lián)用組相對于對照組，瘤體積小，P＜0.05。在接下來的給藥過程中，差異越來越顯著P＜0.01。A549/DDP模型鼠在治療第六次后聯(lián)用組相對于對照組，瘤體積小，P＜0.05。TUNEL染色發(fā)現(xiàn)聯(lián)用組瘤組織凋亡細胞明顯多于對照組，P＜0.05。Ki67染色發(fā)現(xiàn)聯(lián)用

7、組增殖細胞明顯少于對照組，P＜0.05。
　　綜上所述，本研究從細胞水平，動物水平，蛋白水平驗證了EDEA對耐順鉑細胞SKOV3/DDP,A549/DDP,COC1/DDP增敏作用。發(fā)現(xiàn)低濃度的EDEA聯(lián)合低濃度的順鉑對耐藥株SKOV3/DDP,A549/DDP能發(fā)揮顯著的增敏作用，EDEA聯(lián)合順鉑對移植瘤模型生長抑制作用，進一步驗證了EDEA對耐藥株的增敏作用。EDEA對COC1/DDP雖不能發(fā)揮增敏作用，但在低于正常細胞低毒劑