循經(jīng)取穴治療慢性穩(wěn)定性心絞痛的靶向代謝組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　采用超快速液相-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用（ultra fast liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UFLC-MS/MS）技術(shù)，研究循經(jīng)取穴、他經(jīng)取穴和非經(jīng)非穴對(duì)慢性穩(wěn)定性心絞痛（Chronic Stable Angina Pectoris,CSAP）患者血漿目標(biāo)代謝物的影響，探討不同取穴方式的代謝組學(xué)效應(yīng)差異和規(guī)律，從代謝組學(xué)角度為揭示經(jīng)穴效應(yīng)循經(jīng)特異性提供新的科學(xué)依據(jù)。

2、
　　方法：
　　1、循經(jīng)取穴治療CSAP的臨床研究：采用隨機(jī)、對(duì)照的臨床研究方法，將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的43例慢性穩(wěn)定性心絞痛患者隨機(jī)分為循經(jīng)取穴組（A組）、他經(jīng)取穴組（B組）、非經(jīng)非穴組（C組）和基礎(chǔ)治療組（D組），A、B、C組患者在基礎(chǔ)治療的基礎(chǔ)上，按照各自的取穴方案（A組選用內(nèi)關(guān)、通里，B組選用太淵、孔最，C組選用非經(jīng)非穴）在4周內(nèi)接受12次電針治療，D組患者僅接受基礎(chǔ)治療。以四周內(nèi)的心絞痛發(fā)作次數(shù)、心絞痛疼痛程度（視覺(jué)模

3、擬評(píng)分法，Visual Analogue Scale,簡(jiǎn)稱(chēng)VAS評(píng)分）、西雅圖心絞痛量表（Seattle Angina Questionnaire,SAQ）評(píng)分、6分鐘步行試驗(yàn)（6Six minutes’ Walk Test,6MWT）、抑郁自評(píng)量表（Self-rating depression scale,SDS）和焦慮自評(píng)量表（Self-Rating Anxiety Scale,SAS）等作為療效評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別于入組和治療結(jié)束時(shí)評(píng)價(jià)

4、不同取穴方案治療CSAP的臨床效應(yīng)。
　　2、循經(jīng)取穴治療CSAP的血漿代謝組學(xué)研究：在入組時(shí)和治療四周后采集臨床研究中受試者的血漿樣本，運(yùn)用HFLC-MS/MS的檢測(cè)技術(shù)，針對(duì)24種目標(biāo)分子進(jìn)行靶向代謝組學(xué)分析，采用偏最小二乘法（Partial Least Square Discriminant Analysis,PLS-DA）分析等方法，比較不同取穴方式對(duì)CSAP血漿代謝物的影響及組間差異，研究循經(jīng)取穴的代謝組學(xué)效應(yīng)特征。

5、r>　　3、循經(jīng)取穴治療CSAP的血漿代謝組學(xué)與臨床效應(yīng)相關(guān)性研究：運(yùn)用Pearson線性相關(guān)分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，篩選出與循經(jīng)取穴治療CSAP療效相關(guān)的代謝物，并分析其代謝通路，確定潛在的生物標(biāo)志物，探討循經(jīng)取穴的代謝組學(xué)效應(yīng)機(jī)制或規(guī)律。
　　結(jié)果：
　　1、循經(jīng)取穴治療CSAP的臨床研究結(jié)果
　?。?）針刺治療四周后，循經(jīng)取穴組患者心絞痛發(fā)作次數(shù)（P=0.000）和心絞痛疼痛程度（P=0.006）顯著降低，SAQ顯著改

6、善，并且療效優(yōu)于其他3組。此外，患者的焦慮程度（P=0.000）和抑郁程度（P=0.011）均得到顯著改善。
　?。?）在治療結(jié)束時(shí)，循經(jīng)取穴組患者的自覺(jué)癥狀改善率和自評(píng)治療有效率均顯著高于其他三組。
　　2、循經(jīng)取穴治療CSAP的血漿代謝組學(xué)研究結(jié)果
　?。?）循經(jīng)取穴組患者血漿中異亮氨酸（P=0.026）、亮氨酸（P=0.027）、酪氨酸（P=0.049）和纈氨酸（P=0.045）的濃度在針刺后有顯著下降，其中甜菜

7、堿、己酸、肌醇、尿素、草酰乙酸、山梨糖醇、次黃嘌呤、高絲氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、半乳糖、α-酮戊二酸、果糖和纖維二糖等代謝物對(duì)循經(jīng)取穴針刺前后差異的貢獻(xiàn)較大（VIP值>0.8），是關(guān)鍵代謝物。
　?。?）他經(jīng)取穴組患者針刺治療后血漿代謝小分子均無(wú)顯著變化，其中甜菜堿、尿素、半乳糖、果糖和尿酸等代謝物對(duì)針刺前后差異的貢獻(xiàn)較大（VIP值>0.8），是關(guān)鍵代謝物。
　?。?）非經(jīng)非穴組患者

8、針刺治療后血漿中甘氨酸濃度顯著增加（P=0.022），其中尿素、半乳糖和果糖等代謝物對(duì)針刺前后差異的貢獻(xiàn)較大（VIP值>0.8），是關(guān)鍵代謝物。
　?。?）基礎(chǔ)治療組患者治療后血漿中蘇氨酸濃度顯著下降（P=0.014），其中半乳糖和果糖等代謝物對(duì)治療前后差異的貢獻(xiàn)較大（VIP值>0.8），是關(guān)鍵代謝物。
　?。?）與其他各組相比，循經(jīng)取穴組患者治療后血漿代謝物中尿素水平明顯高于其他三組，而半乳糖和果糖的水平低于其他三組，說(shuō)明

9、上述3種代謝物可能是顯示循經(jīng)取穴治療效應(yīng)與其他治療效應(yīng)差異的潛在生物標(biāo)記。
　　3、循經(jīng)取穴治療CSAP的血漿代謝組學(xué)與臨床效應(yīng)相關(guān)性研究結(jié)果
　?。?）受試者基線期臨床數(shù)據(jù)與血漿代謝小分子濃度的Pearson線性相關(guān)分析結(jié)果顯示，瓜氨酸與患者心絞痛疼痛程度正相關(guān)，苯丙氨酸、亮氨酸和纈氨酸與患者6分鐘步行距離正相關(guān)，己酸與患者SAS評(píng)分和SDS評(píng)分均為正相關(guān)。
　?。?）循經(jīng)取穴組受試者治療前后臨床數(shù)據(jù)改變值與血漿代謝

10、小分子濃度改變值的Pearson線性相關(guān)分析結(jié)果顯示，異亮氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、半乳糖、果糖、己酸、苯丙氨酸和瓜氨酸的改變值與患者心絞痛次數(shù)改變值正相關(guān)，纖維二糖、尿素、肌醇、山梨糖醇、庚二酸、次黃嘌呤和α-酮戊二酸的改變值與其負(fù)相關(guān)；己酸的改變值與患者SDS評(píng)分變化值正相關(guān)，尿酸和甘氨酸的改變值與其負(fù)相關(guān)。
　?。?）他經(jīng)取穴組受試者治療前后臨床數(shù)據(jù)改變值與血漿代謝小分子濃度改變值的Pearson線性相關(guān)分析結(jié)果顯示，次

11、黃嘌呤的改變值與患者心絞痛次數(shù)改變值正相關(guān)，甘氨酸的改變值與其負(fù)相關(guān)；高絲氨酸和酪氨酸的改變值與患者心絞痛VAS改變值負(fù)相關(guān)；酪氨酸的改變值與患者6分鐘步行距離改變值正相關(guān)；酪氨酸、色氨酸和甘氨酸的改變值與患者SAS評(píng)分變化值負(fù)相關(guān)；甘氨酸的改變值與患者SDS評(píng)分變化值負(fù)相關(guān)。
　?。?）非經(jīng)非穴組受試者治療前后臨床數(shù)據(jù)改變值與血漿代謝小分子濃度改變值的Pearson線性相關(guān)分析結(jié)果顯示，該組患者治療后代謝分子變化值與臨床癥狀變化

12、值均無(wú)明顯相關(guān)性。
　　（5）基礎(chǔ)治療組受試者治療前后臨床數(shù)據(jù)改變值與血漿代謝小分子濃度改變值的Pearson線性相關(guān)分析結(jié)果顯示，α-酮戊二酸的改變值與患者心絞痛次數(shù)、6分鐘步行距離和SAS評(píng)分的改變值均為負(fù)相關(guān)
　?。?）代謝通路分析結(jié)果顯示，循經(jīng)取穴引起的代謝改變主要涉及氨基酸和嘌呤代謝以及能量代謝途徑；他經(jīng)取穴引起的代謝改變涉及芳香族氨基酸和嘌呤代謝的代謝途徑；非經(jīng)非穴引起的代謝改變以嘌呤代謝途徑為主，但不涉及其他疾

13、病相關(guān)代謝途徑。
　　結(jié)論：
　　1、循經(jīng)取穴治療CSAP的臨床效應(yīng)優(yōu)于他經(jīng)取穴、非經(jīng)非穴和基礎(chǔ)治療，并且能夠改善患者的焦慮抑郁程度。
　　2、四種治療方式對(duì)CSAP的血漿代謝物均有一定的調(diào)節(jié)作用，但針對(duì)性不同，循經(jīng)取穴影響的代謝分子多，代謝通路廣，與其他各組存在顯著差異。
　　3、循經(jīng)取穴和他經(jīng)取穴引起的代謝物改變與其臨床效應(yīng)存在一定相關(guān)性，但循經(jīng)取穴產(chǎn)生的代謝組學(xué)效應(yīng)與心血管相關(guān)目標(biāo)分子關(guān)聯(lián)度更高，與臨床療效