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1、脂溶性藻毒素是海洋中藻類產(chǎn)生的一類次生代謝產(chǎn)物,包括大田軟海綿酸(OA)系列毒素、蛤毒素(PTX)系列毒素、扇貝毒素(YTX)系列毒素、原多甲藻酸(AZA)系列毒素等多系列毒素。脂溶性藻毒素可在貝類體內(nèi)富集或轉(zhuǎn)化,人類食用染毒貝類后會(huì)引起多種嚴(yán)重的中毒反應(yīng)。近年來(lái),由可產(chǎn)生脂溶性藻毒素的藻類引起的有害藻華對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人類健康造成了嚴(yán)重危害。迄今為止,國(guó)內(nèi)外有關(guān)脂溶性藻毒素的研究報(bào)道主要集中于貝類和藻體中的脂溶性藻毒素,對(duì)海洋環(huán)境中的藻毒
2、素研究較少,目前仍缺乏有效檢測(cè)海水中脂溶性藻毒素的方法,而對(duì)海水中脂溶性藻毒素進(jìn)行快速篩查和測(cè)定,對(duì)監(jiān)測(cè)有害藻華發(fā)生后的水質(zhì),研究藻毒素的海洋環(huán)境行為等具有重要意義。本研究開(kāi)發(fā)了可應(yīng)用于海水和藻體中多種脂溶性藻毒素篩查及測(cè)定的樣品前處理方法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法并應(yīng)用于實(shí)際樣品檢測(cè),對(duì)青島近岸海域海水中典型脂溶性藻毒素分布作了大致分析并對(duì)其富集方法作了初探,具體內(nèi)容如下:
1.對(duì)高效液相色譜-多級(jí)質(zhì)譜法在堿性和酸性兩種不同分
3、離體系下檢測(cè)3種典型脂溶性藻毒素OA、YTX、PTX2的效果進(jìn)行了比較。結(jié)果表明,堿性分離體系較之酸性體系具有更好的分離度;多級(jí)質(zhì)譜分析中OA和YTX在堿性體系和酸性體系中的選擇母離子都為[M+Na]+(m/z827.7)和[M-H]-(m/z1141.8),而PTX2則分別為[M+NH4]+(m/z876.7)和[M+Na]+(m/z881.7);在兩種體系下建立的線性回歸方程R2值均大于0.99,YTX在兩種體系中的儀器檢測(cè)限(LO
4、D)均為0.79pg,而OA和PTX2在堿性分離體系中的儀器檢測(cè)限(分別為0.68pg和0.13pg)低于兩者在酸性體系中的儀器檢測(cè)限(分別為1.37pg和0.65pg);酸性分離體系較之堿性體系具有更好的精密度??傮w而言,堿性分離體系具有更好的適用性。
2.建立了海水和藻體中多種脂溶性藻毒素同步篩查分析的新方法。采用固相萃取法用于海水樣品中多種脂溶性藻毒素的富集,并與液液萃取法進(jìn)行了對(duì)比,結(jié)果表明固相萃取法對(duì)不同脂溶性藻毒素
5、具有更好的回收率(55.18%~69.94%),重復(fù)性較好并且有機(jī)溶劑消耗少,更適于海水中多種脂溶性藻毒素的富集。發(fā)展了超聲波細(xì)胞破碎法并超聲波輔助提取法提取有毒藻體中的脂溶性藻毒素,該方法回收率良好(73.40%~79.77%),能滿足藻體樣品中多種脂溶性藻毒素篩查分析的要求。采用高效液相色譜-飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜法聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行樣品檢測(cè),結(jié)合儀器自帶的Masshunter數(shù)據(jù)處理軟件基于精確質(zhì)量數(shù)數(shù)據(jù)庫(kù)完成多種脂溶性藻毒素篩查,可實(shí)現(xiàn)樣
6、品中多種脂溶性藻毒素的快速篩查和定性鑒別。將本研究建立的新方法用于對(duì)海水實(shí)際樣品和實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的藻體樣品中多種脂溶性藻毒素的篩查分析,最終從青島近岸海水中發(fā)現(xiàn)OA和PTX2,從利瑪原甲藻中發(fā)現(xiàn)OA、DTX1和AZA2,說(shuō)明高效液相色譜-飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜法是進(jìn)行海水和藻體中多種脂溶性毒素快速篩查的有效方法。
3.發(fā)展了高效液相色譜-多級(jí)質(zhì)譜法定量測(cè)定海水及藻體中4種典型脂溶性藻毒素,并對(duì)大孔吸附樹(shù)脂法富集海水中的OA和PTX2進(jìn)
7、行了探討。所建立的檢測(cè)方法具有良好的靈敏度、重復(fù)性(RSD<25.00%)和回收率(56.25%~80.20%),能滿足實(shí)際海水和藻體樣品中4種典型脂溶性藻毒素的測(cè)定要求。對(duì)青島近岸海域8個(gè)采樣點(diǎn)海水樣品和4個(gè)南海海水樣品進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果顯示青島近岸海域海水樣品中均存在不同濃度的OA和PTX2,濃度范圍分別為4.24ng/L~9.64ng/L和0.42ng/L~0.74ng/L,南海海水樣品中也檢出低于定量限濃度的OA和PTX2;對(duì)青島
8、近岸海域4個(gè)站點(diǎn)2012年10月到2013年3月間海水中OA和PTX2的濃度變化規(guī)律進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示兩種毒素具有不同的濃度變化趨勢(shì),濃度波動(dòng)范圍分別為2.24ng/L~11.19ng/L和0.10ng/L~0.74ng/L。利瑪原甲藻藻體樣品中測(cè)得含有濃度分別為21.6μg/g和304.4μg/g(濕重)的OA和DTX1。在優(yōu)化所得的大孔吸附樹(shù)脂法富集海水中OA和PTX2的最佳實(shí)驗(yàn)條件下,海水中的OA和PTX2富集率分別可達(dá)65.9
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