生物大分子毛細管電泳分離與預濃集方法研究.pdf

1、核酸和蛋白質作為生命科學中最重要的生物大分子,一直是人們研究的重點。毛細管電泳以其高效、快速、樣品用量少等特點而成為生命科學中研究生物大分子的重要分析分離手段。
　　 論文在毛細管電泳原理、分離模式介紹的基礎上,論述了管壁涂層技術和毛細管電泳在線預濃集技術的研究進展。
　　 針對蛋白質分離的吸附問題,用自制的裝置制備了交聯(lián)鍵合型聚丙烯酰胺涂層柱,有效抑制了電滲流和堿性蛋白的吸附,分離柱效達到105理論塔板數(shù)/米,日內重現(xiàn)

2、性和日間重現(xiàn)性均在5％之內。在無膠篩分模式下對蛋白質-SDS復合物顯示了良好的分離效能。
　　 首次嘗試了利用原位刻蝕的多孔導電膜和非涂敷的石英毛細管在區(qū)帶電泳模式下對實際樣品進樣了濃縮分離。以血漿蛋白為研究對象,對富集和分離的條件進行了探討,初步實現(xiàn)了血漿蛋白的濃縮和分離。以峰面積估算經300 s在線濃集取得了約120倍的濃縮。
　　 首次將DNA的無膠篩分與毛細管電泳多孔導電膜電進樣濃縮相結合,通過對富集和分離條件的

3、優(yōu)化,實現(xiàn)了低濃度DNA樣品片度的濃縮和分離。經300 s電進樣濃縮取得了10-60倍的濃縮(峰面積),從而使常規(guī)紫外檢測器(254 nm)的檢測限降至0.05ng/μL。
　　 毛細管上的多孔導電膜不僅能夠對生物大分子的標準品進行濃集,而且還能對成分復雜的實際樣品進行濃集。與傳統(tǒng)樣品處理方法相結合,基于多孔導電膜的毛細管電泳在線濃縮,脫鹽,分離、檢測一體化的分析系統(tǒng)有可能成為一種實際樣品中低豐度蛋白和低濃度DNA分析有力手段。