擬南芥GDPMPPASE和GALPPASE基因轉(zhuǎn)化生菜研究.pdf

1、維生素C(L-ascorbic acid，AsA)是維持人體正常生長發(fā)育必需的一類微量營養(yǎng)物質(zhì)，但是人類自身卻不能合成以及儲(chǔ)存AsA，必須從外界獲取。而植物性食物是人體維生素C的重要來源，L-半乳糖途徑在植物AsA的生物合成中占有主導(dǎo)地位。GDP-甘露糖焦磷酸化酶（GDPMPPase）和L-半乳糖-1-磷酸化酶(GalPPase)便是L-半乳糖合成途徑中兩個(gè)重要的關(guān)鍵酶, GDPMPPase催化D-甘露糖-1-P生成GDP-D-甘露糖，

2、而GalPPase催化GDP-L-半乳糖-1- P合成L-Gal。為了提高生菜中AsA的含量，根據(jù)GenBank中擬南芥GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因(gmp)和L-半乳糖-1-磷酸化酶基因（galp）序列設(shè)計(jì)特異引物，從擬南芥 cDNA中擴(kuò)增出了gmp和galp基因編碼區(qū)片段，分別連上CaMV35S啟動(dòng)子、MYC序列和NOS終止子后將含gmp/galp基因的表達(dá)盒插入到植物表達(dá)載體pCAMBIA2301中，獲得含有g(shù)mp/galp基因的

3、植物表達(dá)載體p2301-gmp-myc和p2301-galp-myc。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化生菜，分別獲得了64株轉(zhuǎn)gmp基因植株和56株轉(zhuǎn)galp基因植株，PCR檢測(cè)以及Southern Blot雜交和熒光定量PCR分析證實(shí)外源基因已被成功導(dǎo)入生菜基因組中并轉(zhuǎn)錄。采用高效液相色譜法（HPLC-ELSD）測(cè)定轉(zhuǎn)基因生菜中AsA的含量，結(jié)果表明，大多數(shù)轉(zhuǎn)基因生菜中AsA的含量高于對(duì)照植株。AsA含量的HPLC分析結(jié)果顯示：各gmp轉(zhuǎn)基因株系