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文檔簡介
1、骨折愈合是指骨折、截骨、關(guān)節(jié)融合和骨移植術(shù)后的自然骨連接過程。骨折愈合的影響因素眾多,其中骨折區(qū)的力學(xué)環(huán)境是一個重要的方面,骨折經(jīng)適合固定后再誘發(fā)骨折端細(xì)微運(yùn)動,能刺激骨痂生長,加速骨折愈合過程。然而,關(guān)于力學(xué)環(huán)境影響骨愈合過程的細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)機(jī)制目前仍不甚清楚。本課題組早前在臨床治療中發(fā)現(xiàn):完全固定不能加速骨折的痊愈,適當(dāng)給予病人一定的活動量卻可以加速骨折愈合,并加速病人恢復(fù)肢體的功能。因此,探討骨折斷端的力學(xué)環(huán)境對骨折愈合過
2、程的影響不僅可理解骨折愈合機(jī)制,而且對臨床骨折的治療、康復(fù)具有重要的指導(dǎo)意義。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是來源于中胚層的具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞,能夠向成骨、成軟骨細(xì)胞等方向分化,骨折損傷部位對MSCs的募集在骨修復(fù)中發(fā)揮重要的作用,骨折端募集足夠數(shù)量的MSCs是骨折愈合的前提條件和重要的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。研究力學(xué)環(huán)境對骨折端的干細(xì)胞募集和分化的影響對于從細(xì)胞水平和分子水平認(rèn)識骨折愈合機(jī)制可提供
3、新證據(jù),進(jìn)而對臨床骨折的治療和康復(fù)過程的設(shè)計和力度控制具有實(shí)踐指導(dǎo)意義。
骨折愈合早期是力學(xué)刺激促進(jìn)骨折愈合最為有效的時期,本實(shí)驗(yàn)通過手術(shù)制備大鼠骨折動物模型,以不同剛度系數(shù)外固定架固定為骨折區(qū)提供不同力學(xué)環(huán)境的方法,利用流式細(xì)胞術(shù)、RT-qPCR、Western-blot等技術(shù)手段,觀察不同力學(xué)環(huán)境對骨斷端 MSCs募集和分化的影響。
研究目的:
1.通過建立不同剛度系數(shù)外固定架固定大鼠股骨骨折的實(shí)驗(yàn)?zāi)P?/p>
4、,以給予骨折股骨不同的力學(xué)環(huán)境,觀察骨折愈合早期不同力學(xué)環(huán)境對骨斷端MSCs的募集是否產(chǎn)生不同影響,從細(xì)胞水平解釋不同力學(xué)環(huán)境對骨折愈合的影響。
2.從分子水平揭示骨折局部不同力學(xué)環(huán)境在骨折愈合早期對骨斷端MSCs向成骨細(xì)胞譜系和軟骨細(xì)胞譜系分化的不同影響。
3.為骨折愈合機(jī)制研究提供新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),對臨床骨折的治療及康復(fù)中的力學(xué)控制設(shè)計提供理論依據(jù)。
研究方法:
1.建立大鼠股骨骨折模型,以不同剛
5、度系數(shù)的外固定架予以固定,設(shè)置對照組(剛度系數(shù)60.6 N/mm)、高剛度組(剛度系數(shù)18.2 N/mm)和低剛度組(剛度系數(shù)8.5 N/mm)。
2.于術(shù)后當(dāng)天、2周后拍攝X-光片,觀察骨折愈合情況;術(shù)后6周,對骨痂組織進(jìn)行組織學(xué)研究。
3.于術(shù)后2天、4天、6天、10天,將骨折斷端組織取出,分離并計數(shù)有核細(xì)胞。用流式細(xì)胞術(shù)檢測分離所得細(xì)胞中 MSCs所占的比例。計算得到三組不同天數(shù)骨斷端CD29+CD90+(MS
6、Cs)的絕對數(shù)目。
4.于術(shù)后2天、6天、10天、14天分別取骨痂組織,通過RT-qPCR檢測其中成骨相關(guān)基因Runx2、Osterix(OSX)及成軟骨相關(guān)基因Sox9的表達(dá)水平。并通過Western-blot檢測Runx2、Sox9蛋白的表達(dá)。觀察骨斷端力學(xué)環(huán)境對干細(xì)胞分化影響。
研究結(jié)果:
1.影像學(xué)研究顯示,術(shù)后2周時高剛度組骨痂量明顯少于低剛度組。組織學(xué)研究顯示,高剛度組大鼠股骨骨折模型均達(dá)到了骨
7、性鏈接,但骨痂較少。低剛度組大鼠股骨骨折模型出現(xiàn)了軟骨鏈接,但軟骨部分非常薄,最終沒有發(fā)生骨化。
2.隨愈合時間增加,分離得到有核細(xì)胞數(shù)目呈減少趨勢,流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示CD29+CD90+(MSCs)細(xì)胞比例不斷減少,最終計算得到MSCs的絕對數(shù)目2天>4天>6天>10天(P<0.05);術(shù)后同天組間比較,低剛度組多于高剛度組,高剛度組多于對照組(P<0.05)。
3.Runx2、OSX的表達(dá)水平在14天之內(nèi)不斷
8、升高。Sox9的表達(dá),對照組和高剛度組在術(shù)后10天最高,14天有所下降,低剛度組在術(shù)后14天之內(nèi)一直升高。14天之內(nèi)Runx2、OSX及Sox9的表達(dá)水平組間基本低剛度組>高剛度組>對照組。
結(jié)論:
1.在骨折愈合早期,骨折區(qū)力學(xué)環(huán)境會影響募集的MSCs的數(shù)目。固定強(qiáng)度低時,骨折端微動多,募集的MSCs增多。
2.在骨折愈合早期,骨折區(qū)力學(xué)環(huán)境會影響 MSCs向成骨、成軟骨細(xì)胞譜系的分化。固定強(qiáng)度低時,骨折
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