抗菌肽cgMolluscidin和PaDef的重組表達(dá)、純化及活性研究.pdf

1、抗菌肽(Antimicrioal peptide)可以通過(guò)直接的殺死微生物或者免疫調(diào)控來(lái)抵抗外界的侵害。而且，可以對(duì)多種細(xì)菌、真菌起作用而沒(méi)有產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)，具備替代抗生素的潛力。目前天然抗菌肽的產(chǎn)量非常低，顯然無(wú)法滿足大規(guī)模生產(chǎn)的需要。因此，目前迫切的需要找到一種能夠高產(chǎn)有活性抗菌肽的方法。
　　本試驗(yàn)采用基因工程的方法來(lái)表達(dá)外源的抗菌肽，分別采用了兩種常見(jiàn)的表達(dá)系統(tǒng)，用以大腸桿菌為代表的原核表達(dá)系統(tǒng)，來(lái)表達(dá)一種新型的來(lái)源于太

2、平洋牡蠣的大小為55 AA的抗菌肽cgMolluscidin，分別構(gòu)建了兩套重組表達(dá)載體pET28a-cgMolluscidin和pGEX-cgMolluscidin，經(jīng)過(guò)IPTG誘導(dǎo)后目的基因成功表達(dá)于上清中，再利用載體上的標(biāo)簽親和純化后，測(cè)得融合蛋白產(chǎn)量分別為為8.5g/L和12.1g/L。將融合蛋白用腸激酶切后得到了無(wú)氨基酸殘留的目的蛋白cgMolluscidin，用來(lái)做抑菌試驗(yàn)，但是沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的抑菌活性。
　　采用以畢

3、赤酵母為代表的真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)一種來(lái)源于鱷梨果實(shí)大小為45 AA的抗菌肽PaDef，將抗菌肽基因克隆到pPICZαA載體上，成功構(gòu)建了分泌型酵母表達(dá)載體pPICZαA-PaDef。甲醇誘導(dǎo)后目的基因表達(dá)于酵母發(fā)酵液上清中，經(jīng)過(guò)Ni親和純化后測(cè)其產(chǎn)量為158mg/L。用孔穴擴(kuò)散法和最小抑菌濃度MIC法檢驗(yàn)抑菌活性時(shí)，觀測(cè)到使用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)出來(lái)的抗菌肽PaDef表現(xiàn)出對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌ATCC25923、枯草芽孢桿菌151