厚殼貽貝新型抗菌肽的分子特征和重組表達.pdf

1、長久以來,國際社會對抗菌肽的研究主要集中在高等動物和一些低等昆蟲方面,海洋抗菌肽研究是近年來興起的一個熱點。作者從浙江省重要經(jīng)濟養(yǎng)殖貝類厚殼貽貝的血清中分離得到兩種抗菌活性成分,分別命名為Myticusin-1和Mytichitin。通過Edman降解,獲得了二者成熟肽N端部分序列。為了進一步了解二者的基因組成,通過在NCBI提供的數(shù)據(jù)庫中搜索同源核酸序列并以之為模板設(shè)計引物,成功克隆得到二者的成熟肽編碼序列?！皟刹椒ā笔亲髡呓Y(jié)合逆轉(zhuǎn)錄

2、反應(yīng)自身及逆轉(zhuǎn)錄酶固有的特點,并參閱相關(guān)文獻案例設(shè)計的一套用于克隆cDNA3’端非翻譯區(qū)(UTR)序列的方案,在本實驗中獲得了成功。本研究事先前成功構(gòu)建了厚殼貽貝血細胞cDNA文庫, Myticusin-15’端非翻譯區(qū)是從文庫中克隆到的,但并沒有得到Mytichitin的5’端非翻譯區(qū)。經(jīng)過測序確認目前已經(jīng)獲得了Myticusin-1cDNA全序列,其ORF編碼生成Myticusin-1前體肽,全長128aa,前體肽由24個氨基酸長度

3、的信號肽外加104個氨基酸長度的成熟肽組成。編碼Mytichitin成熟肽共56aa,包括6個半胱氨酸。
　　運用實時熒光定量PCR進一步研究了二者的組織特異性分布以及細菌誘導(dǎo)后基因豐度變化情況。結(jié)果表明,前者主要表達場所為血細胞,并在誘導(dǎo)后36h含量達到峰值;后者主要表達場所為性腺,誘導(dǎo)12h后含量達到峰值。
　　通過基因工程的手段,成功將二者活性肽基因?qū)雙ET-28a(+)原核表達載體中。Mytichitin的重組表達