高脂飲食引起肌少癥的機(jī)制研究.pdf

1、目的:隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，膳食結(jié)構(gòu)逐漸西方化，代謝綜合征及心腦血管疾病發(fā)病率急劇上升，高脂飲食(HFD)被認(rèn)為是威脅人類(lèi)健康的重要危險(xiǎn)因素之一。近年來(lái)，因高脂飲食對(duì)老化的九個(gè)標(biāo)志都有影響，能促進(jìn)老化相關(guān)性疾病的發(fā)生，如肌少癥，被認(rèn)為是老化加速器。肌少癥(Sarcopenia)作為以骨骼肌質(zhì)量及其力量的下降為特征的新的老年綜合征，是老年人軀體功能障礙，生活質(zhì)量下降及跌倒、衰弱、失能及死亡的重要危險(xiǎn)因素，逐漸受到重視。隨著老化，肌蛋白平衡傾

2、向肌肉降解一方，更為重要的是，骨骼肌的再生、修復(fù)能力明顯減退。目前認(rèn)為負(fù)責(zé)骨骼肌再生主要為骨骼肌干細(xì)胞，通過(guò)增殖、分化修復(fù)老化過(guò)程中的慢性損傷。隨著研究的進(jìn)展，有效增強(qiáng)骨骼肌干細(xì)胞的增殖及分化功能，可成為延緩肌少癥的有效手段。
　　方法:體內(nèi)研究方面:建立高脂喂養(yǎng)C57/B65月小鼠模型，進(jìn)一步分析西方生活式（高脂飲食）對(duì)小鼠肌纖維量及力量的影響。使用雙能X線儀檢測(cè)小鼠體內(nèi)肌肉、脂肪組織，并計(jì)算其含量;使用小鼠抓力儀測(cè)定小鼠抓力;

3、分離腓腸肌(Gas)及脛骨前肌(TA)，用蘇木糖-伊紅(H&E)染色觀察比較肌纖維橫截面積大小;熒光定量PCR測(cè)定老化基因腫瘤抑制基因(P53、P16)，肌降解蛋白泛素蛋白連接酶E3s(MuRF-1)，炎癥相關(guān)指標(biāo)(IL-6、TNFα)及11β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶(11β-HSD1)。
　　體外研究方面:使用不同濃度棕櫚酸(PA)干預(yù)肌肉干細(xì)胞分化，分析游離脂肪酸對(duì)肌肉干細(xì)胞分化及功能的影響。在小鼠骨骼肌干細(xì)胞誘導(dǎo)分化后，同時(shí)予PA

4、及BVT干預(yù)，用熒光染色法、熒光定量PCR測(cè)定成肌基因肌球蛋白重鏈(MyHC)表達(dá);seahorse能量代謝儀檢測(cè)細(xì)胞的氧耗增加率;熒光定量PCR檢測(cè)線粒體融合基因線粒體融合素基因1(Mfn1)、視神經(jīng)萎縮癥蛋白基因(Opa1)和裂解基因發(fā)動(dòng)相關(guān)因子基因(Drp1)、線粒體分裂素基因1(Fis1)的相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)高脂飲食組小鼠，脂肪組織增加明顯，肌間出現(xiàn)脂肪組織沉積，骨骼肌纖維變細(xì)，而且小鼠抓力相對(duì)減少。熒

5、光定量PCR測(cè)定老化基因腫瘤抑制基因P16升高，肌降解蛋白泛素蛋白連接酶E3s（Atrogin-1和MuRF-1）均增加，高脂誘發(fā)IL-6、TNFα為代表的炎癥指標(biāo)增加，11-βHSD1基因表達(dá)量增加。
　　體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肌肉干細(xì)胞給予不同濃度PA刺激后，PA100umol/l時(shí)MyHC表達(dá)量少，11β-HSD1含量較高;給予PA刺激后MyHC熒光表達(dá)量下降，肌小管融合率減低，用seahorse能量代謝儀檢測(cè)細(xì)胞的氧耗增加率Oxyg

6、enconsumption rates(OCR)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞線粒體氧化呼吸功能受抑制，且線粒體融合/裂解比值下降，裂解基因增加。而加入11β-HSD1特異性抑制劑BVT.2733后，肌小管融合率增加;細(xì)胞氧化呼吸能力改善;線粒體融合/裂解比值增加，裂解基因表達(dá)下降。
　　結(jié)論:高脂飲食促使身體成分改變，脂肪組織明顯增加，骨骼肌纖維變細(xì)，肌肉力量減退。高脂飲食加重骨骼肌萎縮、老化，增強(qiáng)肌肉組織內(nèi)炎癥反應(yīng)。而且抑制肌肉干細(xì)胞分化、影響線粒