豬脂肪組織中ZAG及GR變體的表達及其調控.pdf

1、本試驗旨在探索豬脂肪組織中鋅α2糖蛋白（zinc-alpha2-glycoprotein，ZAG）的表達與調控以及糖皮質激素受體（glucocorticoid receptor, GR）及其變體的分布情況。試驗研究了斷奶大白豬與二花臉豬背脂中ZAG基因的表達及其可能的轉錄調控機制，分析了梅山豬腎周脂與背脂，斷奶階段大白豬與二花臉豬背部皮下脂肪組織中GR及其變體的表達情況。
　　 1.不同品種豬之間ZAG及脂代謝相關基因的表達研究

2、選取35日齡斷奶大白豬與二花臉豬，稱重，斷頸宰殺。宰后采集大白豬與二花臉豬頸背部脂肪，采用相對定量實時熒光PCR以及免疫印跡(Western blot，WB)方法檢測斷奶大白豬與二花臉豬背脂中ZAG及脂代謝相關基因如perilipin，F(xiàn)AS，HSL，PPARγ，PPARα，TNF-α，β3-AR, C/EBP-β，ATGL的表達。本研究首次得到全長為1090bp的豬ZAG基因序列，利用MegAlign軟件與NCBI中序列進行比較，結果

3、表明豬的ZAG基因的核苷酸序列與牛的同源性最高，為82.2％，與小鼠的同源性最低，為69.5％。
　　 二花臉與大白豬ZAG mRNA表達在肝臟中最高，明顯高于其他組織，睪丸組織中表達量最低。大白豬背脂中ZAG mRNA與蛋白表達極顯著高于二花臉豬(P＜0.01)。ZAG可以與β3型腎上腺素能受體結合，大白豬背脂中β3-AR的mRNA表達極顯著低于二花臉豬（P＜0.01）。PPARγ、TNF-α以及perilipin基因mRNA

4、表達在兩品種間無顯著性差異。HSL與C/EBPβmRNA表達大白豬顯著高于二花臉豬(P＜0.05），但蛋白表達以及HSL的磷酸化蛋白表達無差異。而大白豬的脂肪酶活性顯著性高于二花臉豬(P＜0.05）。能量代謝關鍵基因CPT1與UCP2 mRNA表達大白豬顯著高于二花臉豬(P＜0.05)，UCP2蛋白表達大白豬顯著高于二花臉豬（P＜0.05）。本研究結果提示ZAG參與到豬脂肪代謝中并在一定程度上對不同品種豬之間的脂肪沉積造成影響，并且二花

5、臉豬中較高的體脂沉積可能是其通過介導脂肪的分解以及機體產(chǎn)熱的降低使脂肪的利用減少而導致的。
　　 2.豬脂肪組織中GR及變體的表達及分布選取育肥階段梅山豬以及35日齡斷奶大白豬與二花臉豬，稱重，斷頸宰殺。宰后采集育肥梅山豬頸背部脂肪及腎周脂，斷奶大白豬與二花臉豬頸背部脂肪，采用相對定量實時熒光PCR方法檢測豬脂肪組織中GR及exon1變體的表達。結果顯示，GR mRNA表達在育肥梅山豬背脂與腎周脂間無顯著性差異，但是背脂exon

6、1-7和exon1-9的mRNA表達顯著高于腎周脂(P＜0.05）。斷奶大白豬背脂與二花臉豬背脂之間無顯著性差異，然而斷奶大白豬背脂中exon1-6的mRNA表達顯著高于二花臉豬(P＜0.05）。兩品種exon1各變體啟動子的甲基化程度雖然有個別位點是有顯著性差異，但exon1-5與exon1-6之間的啟動子部分以及exon1-6之前的啟動子甲基化程度在兩品種間沒有差異，說明甲基化可能并不是造成exon1-6 mRNA表達品種間差異的主