家豬脂肪組織特異性啟動子元件的克隆.pdf

1、基因修飾豬技術(shù)進(jìn)展迅速，但缺乏具有育種價值的功能基因和調(diào)控元件，成為限制因素。尤其是組織特異性調(diào)控元件，在家豬的研究中鮮見報道。本研究克隆了家豬脂肪組織特異性啟動子元件，為下一步研究其功能打下基礎(chǔ)。
　　本研究首先利用在線軟件Digital Differential Display(DDD)分析，獲得100條家豬脂肪組織（背膘和腹脂）高豐度表達(dá)的ESTs，其中有45條是已知基因。然后對表達(dá)豐度最高的八條基因(LGALS12、ADI

2、POQ、FABP4、LPL、LIPE、CIDEC、SDR16C5和SMAF1)進(jìn)行了Gene Ontolgy(GO)分析，七條基因（或其產(chǎn)物）是以細(xì)胞組件的形式存在，參與著脂肪細(xì)胞的分化和脂肪的合成代謝等過程，ADIPOQ沒有任何與豬相關(guān)的功能注釋。接下來利用實時熒光定量PCR技術(shù)對這8個基因的進(jìn)行了組織表達(dá)譜分析，結(jié)果表明它們均在豬脂肪組織中高豐度表達(dá)，而且LGALS12、ADIPOQ和FABP4三個基因的表達(dá)具有脂肪組織特異性，由此

3、推斷它們的啟動子也具有脂肪組織特異性。為了獲得這三條基因上游調(diào)控區(qū)序列信息，本研究從豬的基因文庫中篩選含有目的基因的陽性克隆，最終獲得了含有LGALS12的陽性BAC克隆一個、含有ADIPOQ的陽性BAC克隆兩個和含有FABP4序列的BAC兩個;通過染色體步移測序，目前已獲知了FABP4起始密碼子上游10 kb的序列，ADIPOQ起始密碼子上游6.8 kb的序列以及LGALS12起始密碼子上游2 kb的序列。再利用軟件NNPP和PLAC