瘦素及其蛋白在甲狀腺相關(guān)眼病眼眶脂肪組織中的表達及意義.pdf

1、目的 甲狀腺相關(guān)眼病(TA0)是以眼外肌和眶脂肪／結(jié)締組織容量增多為特征的自身免疫性疾病。眼眶內(nèi)前脂肪成纖維細胞在適當條件下能轉(zhuǎn)化為脂肪細胞，使眼眶脂肪組織增多，引起眼球前突，它還能分泌多種細胞因子：瘦素(leptin)作為脂肪細胞分泌的特異性因子，它可能通過多種機制參與TAO的發(fā)生發(fā)展。本研究的目的是利用TAO患者和正常人眼眶脂肪組織和體外誘導(dǎo)分化的眼眶脂肪細胞，檢測瘦素mRNA的表達情況；TNF-α、IL-6對瘦素mRNA表

2、達的影響；重組人瘦素蛋白(rh-1eptin)對TAO患者眼眶前脂肪成纖維細胞增殖、移行以及細胞分化過程中細胞內(nèi)脂質(zhì)形成的作用。探討瘦素在TAO發(fā)病機制中的作用及意義，探索防治TAO的新途徑。 方法 1．提取TAO患者和正常人眼眶脂肪組織總RNA，用實時熒光定量PCR的方法，檢測瘦素mRNA的表達。 2．對體外培養(yǎng)TAO患者與正常人眼眶前脂肪成纖維細胞進行誘導(dǎo)分化，用實時熒光定量PCR的方法檢測分化后細胞內(nèi)瘦素m

3、RNA的表達。油紅染色結(jié)合圖像分析技術(shù)測定分化過程中細胞內(nèi)脂質(zhì)的形成。 3．采用不同濃度、作用時間的TNF-α、IL-6處理TAO患者分化第10天的眼眶脂肪細胞，用實時熒光定量PCR的方法檢測瘦素mRNA表達。 4．用重組人瘦素蛋白處理體外培養(yǎng)的TAO患者眶前脂肪成纖維細胞，MTT法檢測細胞的增殖，劃線法檢測細胞的移行。重組人瘦素蛋白處理TAO患者分化第10天的眼眶脂肪細胞，油紅染色結(jié)合圖像分析技術(shù)檢測細胞內(nèi)脂質(zhì)形成情況

4、。 結(jié)果 1．TAO患者與正常人眼眶脂肪組織樣本均表達瘦素mRNA；TAO患者眼眶脂肪組織中瘦素mRNA的表達量高于正常對照者。 2．體外培養(yǎng)的TAO患者和正常人眼眶前脂肪成纖維細胞在誘導(dǎo)分化刺激下，均能向脂肪細胞方向分化；細胞內(nèi)脂質(zhì)形成隨分化進程而升高，且患者組高于正常人組；TAO患者分化后眼眶脂肪細胞的瘦素mRNA表達量高于正常人。 3．TNF-α、IL-6對TAO患者體外分化第10天的眼眶脂肪細胞的

5、瘦素mRNA表達有下調(diào)作用，呈時間一劑量依賴性。 4．500ng／ml重組人瘦素蛋白明顯促進體外培養(yǎng)的TAO患者眼眶前脂肪成纖維細胞增殖，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但較低的濃度組未能觀察到具有統(tǒng)計學(xué)意義的促增殖效果。500ng／ml重組人瘦素蛋白作用24h，促進TAO患者眼眶前脂肪成纖維細胞的移行，隨劑量減少，促進作用降低；其中，50-500ng／ml的瘦素實驗組與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。500ng／ml重組人瘦素蛋

6、白能抑制TA0患者眼眶脂肪細胞的脂質(zhì)形成，隨劑量減少，抑制作用降低。 結(jié)論 本研究結(jié)果顯示，TAO患者眼眶脂肪組織中的瘦素mRNA表達升高受眼眶微環(huán)境中細胞因子的調(diào)節(jié)，眼眶脂肪組織中瘦素表達的增高能促進眼眶前脂肪成纖維細胞的增殖、移行，或抑制細胞內(nèi)脂質(zhì)形成。瘦素在TAO的發(fā)病機制中可能起到一定的作用或有一種反饋調(diào)節(jié)的機理。對其蛋白表達、調(diào)節(jié)機制、信號傳導(dǎo)途徑等的進一步研究不僅讓我們更接近TAO的發(fā)病機制，也可為TAO的預(yù)