氰戊菊酯對(duì)公雞繁殖生理繼代影響及其機(jī)制探討.pdf

1、為了研究氰戊菊酯(fenvalerate，F(xiàn)en)對(duì)公雞繁殖生理的繼代影響機(jī)理，本試驗(yàn)(1)選取40只健康30周齡的雄性青腳麻雞，隨機(jī)分為4組，分別持續(xù)8天灌喂含0.0、0.1、1.0和10 mg·kg-1·BW Fen的葵花籽色拉油，分析Fen對(duì)公雞性腺軸基因表達(dá)及其功能的影響;(2)用10 mg·kg-1·BW Fen持續(xù)灌喂30周齡的成年公雞4周，通過人工授精方式對(duì)未經(jīng)Fen處理的健康母雞進(jìn)行配種，以繁殖F1代，F(xiàn)1代公雞對(duì)未經(jīng)F

2、en處理的健康母雞進(jìn)行配種，繁育F2代，探討Fen對(duì)公雞繁殖生理的繼代影響及分子機(jī)制。
　　 1.不同劑量Fen對(duì)成年公雞性腺軸基因表達(dá)及其功能的影響
　　 1.1精液質(zhì)量和睪丸組織形態(tài)
　　 成年公雞持續(xù)8天灌喂Fen，導(dǎo)致公雞精液質(zhì)量顯著下降，0.1、1.0和10 mg·kg-1Fen處理組公雞精子畸形率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），但各處理組之間無顯著性差異。成年公雞持續(xù)8天灌喂Fen，各處理組公雞睪丸的

3、相對(duì)重量和生精小管直徑與對(duì)照相比無顯著性差異。
　　 1.2性激素
　　 用0.1、1.0和10 mg·kg-1 Fen持續(xù)灌喂成年公雞8天，各處理組在灌喂的第2天血清中睪酮(Testosterone，T)水平與對(duì)照相比無顯著性差異，處理的第4天血清中T含量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，10 mg·kg-1 Fen處理組血清中T含量顯著低于對(duì)照（P＜0.05），且這種趨勢(shì)持續(xù)到第8天。
　　 各處理組在灌喂的第2天血清中雌二醇（

4、Estradiol，E2）水平與對(duì)照相比無顯著性差異，處理第4天0.1和1.0 mg·kg-1 Fen處理組血清中E2含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），但10 mg·kg-1 Fen血清中E2含量與各組差異不顯著;處理的第8天，0.1mg·kg-1 Fen處理組血清中E2含量顯著低于對(duì)照和10 mg·kg-1 Fen處理組（P＜0.05），1.0和10 mg·kg-1 Fen處理組和對(duì)照差異不顯著。
　　 1.3性腺軸基因表達(dá)

5、
　　 成年公雞持續(xù)8天灌喂10 mg·kg-1 Fen顯著上調(diào)下丘腦促性腺激素釋放激素1(gonadotropin-releasing hormone1，GnRH1)和雌激素α受體(Estrogen receptor alpha，ERα)的基因表達(dá)(P＜0.05)，0.1和1.0 mg·kg-1 Fen的處理對(duì)下丘腦GnRH、ERα的基因表達(dá)無顯著影響。0.1、1.0和10 mg·kg-1 Fen對(duì)下丘腦雄激素受體(Andro

6、genreceptor, AR)和雌激素β受體(Estrogen receptor alpha, ERβ)基因表達(dá)無顯著影響。
　　 成年公雞持續(xù)8天灌喂Fen顯著影響垂體ERβ和AR的基因表達(dá)，其中1.0 mg·kg-1Fen顯著下調(diào)垂體ERβ的基因表達(dá)(P＜0.05)，0.1和10 mg·kg-1 Fen對(duì)垂體ERβ表達(dá)無顯著影響。0.1 mg·kg-1 Fen顯著上調(diào)垂體AR基因表達(dá)（P＜0.05），1.0和10 mg·k

7、g-1Fen對(duì)垂體AR的基因表達(dá)無顯著影響。0.1、1.0、和10 mg·kg-1 Fen對(duì)垂體GnRHR1、GnRHR2和ERβ基因表達(dá)無顯著影響。
　　 成年公雞持續(xù)8天灌喂Fen顯著影響睪丸ERα、AR的基因表達(dá)，其中0.1 mg·kg-1Fen顯著上調(diào)睪丸ERα、AR的基因表達(dá)（P＜0.05）。但0.1、1.0、和10 mg·kg-1 Fen對(duì)睪丸ERβ的基因表達(dá)無顯著影響。
　　 2.Fen對(duì)公雞繁殖生理的繼代

8、影響
　　 2.1 Fen對(duì)公雞精子基因組DNA性腺軸功能基因甲基化水平的影響
　　 用10 mg·kg-1 Fen持續(xù)4周處理成年公雞，對(duì)公雞精子基因組DNA中性別決定區(qū)域(SRY(sex determining region Y) box9，SOX9)、細(xì)胞色素P45011A1(cytochromeP45011A1,013254)、類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(Steroidogenic acute regulator

9、yprotein，STAR)、ERα(ESR1)、雄性甲基化區(qū)(male hypermethylated(MHM) region onthe Z chromosome，MHM)、孕激素受體結(jié)合蛋白(Progesterone receptor binding protein，Q9YH14)、促性腺激素釋放激素受體1(gonadotropin-releasing hormone receptor,Q9DDC9)、促性腺激素釋放激素受體2(g

10、onadotropin-releasing hormone receptor,Q5EFE0)、促黃體激素受體（luteinizing hormone/choriogonadotropin receptor, Q9DER3）基因的甲基化水平無顯著影響，但顯著下調(diào)類固醇17α羥化酶(Steroid17-alpha-hydroxylase/17，20 lyase，CP17A)和孕酮膜受體1(Membrane-associatedprogest

11、erone receptor component1，PGRC1)基因的甲基化水平(P＜0.05)，顯著上調(diào)核受體亞家族5A1（nuclear receptor subfamily5，group A，member1，NR5A1）基因的甲基化水平（P＜0.05）。
　　 單一CpG位點(diǎn)甲基化水平的分析表明，F(xiàn)en顯著降低激活素受體2A(Activinreceptor type-2A，AVR2A)基因的4個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化水平(P＜0

12、.05)和CP17A基因9個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化水平(P＜0.05)，顯著提高NR5A1基因的1個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化水平（P＜0.05），抑制素2（Prohibitin-2，PHB2）基因有1個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化水平極顯著提高（P＜0.01），5個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化水平極顯著降低（P＜0.01）。
　　 2.2 Fen處理成年公雞對(duì)其雄性后代性腺發(fā)育及繁殖生理的影響
　　 2.2.1雄性后代第二性征和睪九發(fā)育
　　 10

13、mg·kg-1 Fen持續(xù)處理成年公雞4周，其F1代公雞第二性征發(fā)育受阻，在14-34周齡期間，處理組F1代公雞雞冠長(zhǎng)度顯著小于對(duì)照組(P＜0.05);16-34周齡期間肉髯長(zhǎng)度顯著小于對(duì)照組（P＜0.05），16-30周齡期間右距長(zhǎng)顯著小于對(duì)照組(P＜0.05)。處理組F1代公雞在35周齡時(shí)肉髯和睪丸相對(duì)重量顯著小于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 F2代公雞在14-34周齡右側(cè)距長(zhǎng)顯著小于對(duì)照組（P＜0.05），雞冠和肉髯長(zhǎng)度

14、的發(fā)育與對(duì)照組相比無顯著性差異。35周齡時(shí)，F(xiàn)2代公雞的雞冠、肉髯和睪丸相對(duì)重量與對(duì)照組相比差異不顯著。
　　 睪丸組織顯微結(jié)構(gòu)分析表明，處理組F1代睪丸組織生精小管直徑極顯著小于對(duì)照組(P＜0.01)，但處理組F2代的睪丸組織生精小管直徑與對(duì)照組相比差異不顯著。
　　 2.2.2雄性后代血清性激素水平
　　 血清中性激素水平的分析表明，處理組F1和F2代公雞30周齡血清E2水平均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，

15、T水平與對(duì)照組相比差異不顯著。
　　 2.2.3雄性后代性行為表現(xiàn)
　　 母雞擇偶試驗(yàn)(female mate choice trial)結(jié)果表明，處理組F1代公雞對(duì)母雞吸引力較對(duì)照低，母雞在其圈前停留時(shí)間顯著少于對(duì)照組（P＜0.05），但啼鳴、拍翅膀、跳舞、交配行為頻率與對(duì)照組相比差異不顯著。處理組F2代公雞啼嗚、拍翅膀、跳舞、交配行為頻率及其母雞在其圈前和圈內(nèi)停留時(shí)間與對(duì)照組相比差異不顯著。
　　 以上研究結(jié)