氰戊菊酯農(nóng)藥的生殖毒性研究及其相關(guān)機(jī)理探討.pdf

1、農(nóng)藥是一大類重要的環(huán)境污染物，在人類的生產(chǎn)和生活環(huán)境中普遍存在。近年來由于有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥毒性高，在環(huán)境中殘留量大，對環(huán)境污染嚴(yán)重，在很多國家被禁止使用，而擬除蟲菊酯類農(nóng)藥高效、低毒被廣泛使用。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥能夠影響血清及睪丸中性激素水平和酶的活性，有明顯的生殖毒性作用。擬除蟲菊酯也是一種環(huán)境雌激素，具有類雌激素樣作用，可通過影響支持細(xì)胞的功能來干擾下丘腦-性腺軸的調(diào)節(jié)作用，使精子發(fā)生過程受損，導(dǎo)致少精子、無精子。氰戊菊酯(fenv

2、alerate；Fen)，作為一種Ⅱ型擬除蟲菊酯農(nóng)藥，其毒性作用小，適用范圍廣。本課題選擇Fen，立足于動物實驗，探討其雄性生殖毒性及其作用的機(jī)理。 本研究旨在探討Fen對雄性大鼠精子計數(shù)、活力、生殖激素的影響，以及其對生精細(xì)胞的毒性作用。實驗采用成年雄性SD大鼠，按體重每日灌胃一次，分別以0、20、40、80mg/kg劑量的Fen連續(xù)灌胃染毒15d和30d。按常規(guī)方法進(jìn)行精子計數(shù)和精子活力檢測，應(yīng)用放免法和化學(xué)發(fā)光免疫法測定大

3、鼠血清中卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、睪酮(T)、雌二醇(E2)和睪丸勻漿中T、E2水平；附睪和睪丸石蠟包埋后切片，HE常規(guī)染色，用免疫組織化學(xué)方法檢測大鼠生精細(xì)胞中Bax、Bcl-2兩個凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)；利用分子生物學(xué)技術(shù)，用Westrn Blot檢測Bax蛋白的表達(dá)，用RT-PCR和Real-Time PCR對bax和bCl-2的mRNA水平進(jìn)行半定量，分別從蛋白和mRNA水平來對免疫組化的結(jié)果進(jìn)行校正。 Fe

4、n染毒15d時，與0mg/kg組相比，40mg/kg劑量組精子數(shù)量明顯減少(P<0.01)，20和40mg/kg組睪丸勻漿中T水平顯著降低(P<0.01，P<0.05)，血清LH、FSH水平隨染毒劑量的增加而升高，且FSH水平和染毒劑量有顯著的劑量-效應(yīng)關(guān)系(P<0.05)；睪丸生精小管管腔直徑隨著染毒劑量的增高而逐漸減小，在Fen 40mg/kg組極顯著的減小(P<0.01)；間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少，排列緊密，細(xì)胞萎縮，胞漿嗜酸性增強(qiáng)，核致

5、密深染；大鼠睪丸生精細(xì)胞中Bax蛋白的陽性表達(dá)隨著染毒劑量的增加逐漸增強(qiáng)，40mg/kg組表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.01)，Bcl-2蛋白的陽性表達(dá)則隨著染毒劑量的增加逐漸減弱，20、40mg/kg劑量組表達(dá)顯著減弱(P<0.05，P<0.01)；B暑D(蛋白量隨著Fen染毒劑量的增加而有增多的趨勢，F(xiàn)en40mg/kg組Bax蛋白的量較多；bax基因隨著染毒劑量的增大而表達(dá)增強(qiáng)，但各組間差異不顯著；隨著染毒劑量的增加bcl-2基因的表達(dá)在

6、各組間無差異。 Fen染毒至30 d時，各組間精子數(shù)量差異不顯著，與0mg/kg組相比，40mg/kg劑量組(a+b)級精子活力顯著降低(P<0.05)，血清LH、FSH水平隨染毒劑量的增加而升高，但差異不顯著；實驗組生精小管管腔直徑都發(fā)生極顯著的減小(P<0.01)；間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少，排列緊密，細(xì)胞萎縮，胞漿嗜酸性增強(qiáng)，核致密深染；40mg/kg劑量組生精上皮層數(shù)減少，部分管腔生精上皮脫落嚴(yán)重，僅殘余少量支持細(xì)胞；大鼠睪丸生精

7、細(xì)胞中BBK蛋白的陽性表達(dá)隨著染毒劑量的增加逐漸增強(qiáng)，20、40mg/kg組表達(dá)極顯著的增強(qiáng)(P<0.01)，Bcl-2蛋白的陽性表達(dá)則隨著染毒劑量的增加逐漸減弱，在40mg/kg劑量組表達(dá)極顯著的減弱(P<0.01)；Bax蛋白也有隨著Fen染毒劑量增加而增多的趨勢，但是不明顯；bax基因的表達(dá)在40mg/kg劑量組顯著減小(P<0.05)，bcl-2基因在各組間無差異。 以上結(jié)果顯示，F(xiàn)en對雄性大鼠有明顯的生殖毒性作用，能