抗草甘膦（EPSPs）基因及檸檬酸合酶（CS）基因?qū)λ镜倪z傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、水稻是最重要的糧食作物，是世界近一半人口的主糧。雜草危害是造成水稻減產(chǎn)的主要原因之一。通過除草劑來控制雜草己成為現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)不可缺少的一部分，但除草劑在消滅雜草的同時也對作物產(chǎn)生了傷害作用。 磷是生命的必需元素之一，在作物的生長發(fā)育中起著重要的作用。然而土壤有效磷的缺乏是全世界范圍所面臨的共同問題。 已有的研究表明植物通過分泌檸檬酸活化土壤中難溶性無機磷從而提高了土壤磷的可利用性，草甘瞵通過抑制植物的5-烯醇式丙酮酰莽草酸

2、-3-磷酸合酶（EPSPs），非選擇性的殺滅雜草和作物。本研究通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將本研究室人工改造合成的抗除草劑草甘膦（EPSPs）基因和來源于假單胞桿菌的檸檬酸合酶（CS）基因分別導(dǎo)入粳稻品種中花11和優(yōu)良秈型恢復(fù)系明恢86中，使該品種獲得抗除草劑性能，以及改善其低磷敏感性能。其主要研究結(jié)果如下： 1.通過磷梯度試驗，確定明恢86、93-11、珍汕97和明恢63四個秈稻品種磷營養(yǎng)缺乏的最佳篩選濃度為30～60 mg/kg，

3、并確定明恢86為磷敏感品種。 2.通過草甘膦敏感性試驗，確定了粳稻品種中花11在愈傷組織水平對草甘膦的篩選濃度600 mg/L，可將其作為其他水稻品種抗性篩選的依據(jù)。 3.通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將本研究室人工合成的抗除草劑草甘瞵（EPSPs）基因轉(zhuǎn)化粳稻品種中花11的愈傷組織，得到138株再生植株，PCR檢測結(jié)果顯示其中87株能擴增出特異目標條帶，Southern結(jié)果也說明外源基因已整合到受體基因組中。再生植株（T<,0

4、>）用除草劑農(nóng)達涂抹葉片正反面進行鑒定，轉(zhuǎn)基因陽性植株相對于非轉(zhuǎn)基因植株表現(xiàn)出草甘膦抗性；同時將T<,0>代收獲的部分種子（T<,1>）種植于溫室，在苗期噴施除草劑農(nóng)達，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株后代對除草劑的抗性有分離。 4.通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將抗除草劑草甘瞵（EPSPs）基因和檸檬酸合酶（CS）基因同時轉(zhuǎn)化秈稻優(yōu)良恢復(fù)系明恢86的愈傷組織，共獲得48株T<,0>再生植株；經(jīng)PCR檢測，其中22株為轉(zhuǎn)基因陽性植株；對陽性轉(zhuǎn)基因植株的S