利用顯微注射技術(shù)制備大片段基因和雙基因轉(zhuǎn)基因小鼠.pdf

1、DNA顯微注射技術(shù)雖然因?yàn)橄鄬?duì)低效、整合隨機(jī)等問(wèn)題受到很多爭(zhēng)議，但此技術(shù)具有對(duì)所轉(zhuǎn)基因片段大小無(wú)限制，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)多基因注射和轉(zhuǎn)基因不用標(biāo)記等優(yōu)勢(shì)，使其仍是制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物最為廣泛的技術(shù)。轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)于建立人類疾病模型，揭示發(fā)病機(jī)理，探索治療途徑具有十分重要的意義，同時(shí)轉(zhuǎn)基因小鼠在真核生物基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究以及外源基因在大家畜整合表達(dá)的預(yù)測(cè)等方面發(fā)揮著重要作用，所以制備轉(zhuǎn)基因小鼠有著重要的研究意義。本實(shí)驗(yàn)以顯微注射技術(shù)制備了大片段基因和

2、雙基因轉(zhuǎn)基因小鼠。 制備大片段轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)是以BAC為載體的140kb人乳鐵蛋白基因(Humanlactoferrin.hLF)為目的基因進(jìn)行的顯微注射，注射了1840枚原核期受精卵，移植了80只受體，出生111只子鼠，檢測(cè)得到10只陽(yáng)性鼠，出生率為50％，陽(yáng)性率為9.0％，與以質(zhì)粒為載體的小片段轉(zhuǎn)基因相比較，出生率和陽(yáng)性率均沒(méi)有顯著差異。陽(yáng)性原代鼠中有7只將所轉(zhuǎn)基因遺傳給了后代，3只未將所轉(zhuǎn)基因遺傳給后代。從陽(yáng)性原代鼠整合目

3、的基因的完整性分析得出，除兩只不完整外其余陽(yáng)性鼠均整合了完整的目的基因。 制備雙基因轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)是以腎綜合征出血熱(HemorrhagicFeverwithRenalSyndrome,HFRS)抗體的重輕鏈基因和巖藻糖轉(zhuǎn)移酶2，3(fucosyltransferases2,3,FUT2,3)基因?yàn)槟康幕蜻M(jìn)行的顯微注射。其中制備HFRS抗體的重輕鏈基因的轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)注射1350枚原核期受精卵，移植了60只受體，出生了75只子鼠

4、，檢測(cè)得到6只雙基因共整合陽(yáng)性鼠，陽(yáng)性率為8％，重鏈基因整合鼠12只，比率16％。輕鏈基因整合鼠6只，比率8％。在制備巖藻糖轉(zhuǎn)移酶2，3(FUT2，F(xiàn)UT3)基因的轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)，注射1050枚原核期受精卵，移植了42只受體，出生了80只子鼠，得到9只共整合陽(yáng)性鼠，陽(yáng)性率為11.3％，F(xiàn)UT2基因整合鼠11只，比率13.8％。FUT3基因整合鼠13只，比率16.3％。共注射均得到了共整合的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性鼠。共注射雙基因共整合的效率不低于僅整合