利用精子載體法制備轉基因小鼠疾病模型的初步研究.pdf

1、精子介導基因轉移是以精子為載體，在受精時將外源目的基因導入卵母細胞，是目前轉基因動物研究中簡單而高效的方法學之一。本研究以ICR小白鼠為試驗動物，用精子載體法制備轉基因小鼠模型，并根據(jù)得到的結果分析討論精子載體法制備轉基因動物的可行性及優(yōu)缺點。 本文進行了如下研究：外源DNA轉染小鼠精子的研究：利用DIG末端標記技術和免疫組化技術研究小鼠精子轉染外源DNA的效率。試驗結果發(fā)現(xiàn)，不同小鼠個體精子轉染陽性率有明顯差異，平均為13％左

2、右。小鼠精子具有自發(fā)結合外源DNA能力，結合部位集中在精子頂體后軀，結合的外源DNA首先“掛”在精子膜表面，繼而被內化轉運到細胞內，但并非所有的結合DNA都被內化。 精子介導法制備轉基因小鼠的試驗研究：利用考馬斯亮藍染色技術評價小鼠精子頂體反應發(fā)生的情況，選擇合適的體外受精液。利用小鼠體外受精技術，將體外轉染GFP并獲能的小鼠精子對成熟卵母細胞進行體外受精，受精卵進行體外培養(yǎng)，熒光顯微鏡下觀察胚胎，結果表達GFP的陽性率為4.7