CRH、ACTH和GC對體外培養(yǎng)染鋁大鼠脾淋巴細(xì)胞免疫功能的影響.pdf

1、為了探究促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和糖皮質(zhì)激素(GC)對體外染鋁淋巴細(xì)胞免疫功能的影響。本實驗選用健康Wistar大鼠(200～210 g)的脾臟為淋巴細(xì)胞的提取對象，無菌條件下提取淋巴細(xì)胞后建立體外淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系。每項激素干預(yù)實驗均分為五組，各組實驗體系分別為:
　　 CRH實驗:0 mmol/L AlCl3+0 mol/L CRH（空白組，C-B），1/10 IC50 AlCl3+0

2、mol/L CRH（對照組，C-C），1/10 IC50 AlCl3+1×10-10 mol/L CRH（低劑量組，C-L），1/10 IC50 AlCl3+1×10-9 mol/L CRH（中劑量組，C-M），1/10 IC50 AlCl3+1×10-8 mol/L CRH（高劑量組，C-H）。ACTH實驗:0 mmol/L AlCl3+0 mol/L ACTH(空白組，A-B)，1/10 IC50 AlCl3+0 mol/L ACT

3、H（對照組，A-C），1/10 IC50 AlCl3+1×10-13 mol/L ACTH（低劑量組，A-L），1/10 IC50 AlCl3+1×10-12 mol/L ACTH（中劑量組，A-M），1/10 IC50 AlCl3+1×10-11 mol/L ACTH(高劑量組，A-H)。
　　 GC實驗:0 mmol/L AlCl3+0 mol/L Cort（空白組，G-B），1/10 IC50 AlCl3+0 mol/L

4、Cort（對照組，G-C），1/10 IC50 AlCl3+1×10-8 mol/L Cort(低劑量組，G-L)，1/10 IC50 AlCl3+1×10-7 mol/LCort（中劑量組，G-M），1/10 IC50 AlCl3+1×10-6 mol/L Cort（高劑量組，G-H）。
　　 用CCK-8法檢測鋁對淋巴細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)和T、B淋巴細(xì)胞增殖率，用流式細(xì)胞術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞亞群，放射免疫分析法檢測IL

5、-2和TNF-α分泌量，ELISA檢測IgG分泌量和細(xì)胞內(nèi)cAMP含量，實時定量RT-PCR(qRT-PCR)檢測促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體1(CRHR1)、促腎上腺皮質(zhì)激素受體(ACTHR)和糖皮質(zhì)激素受體(GCR) mRNA表達(dá)，蛋白免疫印跡(Western Blot)法檢測GCR蛋白表達(dá)。實驗結(jié)果如下:
　　 1.CRH干預(yù)實驗:
　　 1).C-L組T、B淋巴細(xì)胞增殖，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4

6、+/CD8+值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量高于C-C組（P＜0.05;P＜0.01）;C-M組T、B淋巴細(xì)胞增殖，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量較C-C組變化不顯著（P＞0.05）;C-H組T淋巴細(xì)胞增殖，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量低于C-C組（P＜0.05;P＜0.01）。表明低濃度CRH能緩解

7、鋁對體外培養(yǎng)大鼠淋巴細(xì)胞的免疫抑制狀態(tài);高濃度CRH能加重鋁對體外培養(yǎng)大鼠淋巴細(xì)胞的免疫抑制狀態(tài)。
　　 2).C-L組淋巴細(xì)胞cAMP含量低于C-C組(P＜0.05)，CRHR1 mRNA表達(dá)量變化不顯著(P＞0.05);C-M組cAMP含量較C-C組變化不顯著(P＞0.05)，CRHR1 mRNA表達(dá)量升高(P＜0.01);C-H組cAMP含量高于C-C組(P＜0.01)，CRHR1 mRNA表達(dá)量升高(P＜0.05)。說明

8、CRH對體外染鋁淋巴細(xì)胞免疫功能的“CRHR-cAMP”信號調(diào)節(jié)機制發(fā)生紊亂。
　　 2.ACTH干預(yù)實驗:
　　 1).A-L組和A-M組T、B淋巴細(xì)胞增殖，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量較A-C組變化不顯著（P＞0.05）;A-H組T、B淋巴細(xì)胞增殖，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量低于A-C

9、組（P＜0.05;P＜0.01）。表明高濃度ACTH能加重鋁對體外培養(yǎng)大鼠淋巴細(xì)胞的免疫抑制狀態(tài)。
　　 2).A-L組和A-M組cAMP含量較A-C組變化不顯著(P＞0.05)，A-H組cAMP含量高于A-C組(P＜0.01);各濃度組ACTHR mRNA表達(dá)量較A-C組均顯著升高(P＜0.01)，揭示ACTH對體外染鋁淋巴細(xì)胞免疫功能的“ACTHR-cAMP”信號調(diào)節(jié)機制紊亂。
　　 3.GC干預(yù)實驗:
　　

10、 1).G-L組淋巴細(xì)胞T、B淋巴細(xì)胞增殖，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量高于G-C組（P＜0.05;P＜0.01）;G-M組T、B淋巴細(xì)胞增殖，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量較G-C組變化不顯著(P＞0.05);G-H組T、B淋巴細(xì)胞增殖，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+值，IL-2、T

11、NF-α和IgG的分泌量低于G-C組（P＜0.05;P＜0.01）。表明低濃度GC能緩解鋁對體外培養(yǎng)大鼠淋巴細(xì)胞的免疫抑制狀態(tài);高濃度GC能加重鋁對體外培養(yǎng)大鼠淋巴細(xì)胞的免疫抑制狀態(tài)。
　　 2).G-L組淋巴細(xì)胞cAMP含量低于G-C組（P＜0.05），GCR mRNA和蛋白表達(dá)量升高(P＜0.05);G-M組cAMP含量、GCRmRNA和蛋白表達(dá)量較G-C組變化均不顯著(P＞0.05);G-H組cAMP含量高于G-C組(P＜