厚殼貽貝多糖MPs分離純化、理化性質與立體結構測定及生物學活性研究.pdf

1、目的：分離純化得到不同純度厚殼貽貝多糖(Mytiluscoruscuspolysaccharides，MPs)，并測定其理化性質，包括糖含量測定、純度鑒定、分子量測定、單糖組分分析、糖苷鍵類型證明、一維和二維結構測定；純化得到純品進行生物學活性探索。 方法：1.厚殼貽貝多糖MPs的分離純化用組織勻漿后熱水抽提，Sevag法除蛋白，乙醇沉淀，再經(jīng)DEAE-cellulose52、SephacrylS-200HR柱層析和高效液相色譜

2、(HPLC)，分離純化得到貽貝多糖純品MPs。 2.厚殼貽貝多糖MPs的理化性質與結構測定制備得到多糖樣品行全波段的最大吸收波長光譜掃描和硫酸—苯酚比色法測定糖含量；經(jīng)紫外光譜掃描分析、染料結合比色法、HPLC、聚丙烯酰胺電泳鑒定其純度，凝膠過濾法測量分子量，紅外光譜掃描分析多糖特征吸收譜和糖苷鍵類型，再經(jīng)薄層色譜(TLC)、氣相色譜(GC)進行單糖組分分析，NMR測定多糖純品的一維和二維結構。 3.厚殼貽貝多糖MPs的

3、生物學活性研究厚殼貽貝多糖純品MPs-B1溶液，分別行MTT比色法測定大鼠睪丸支持細胞的存活率以了解其促進睪丸支持細胞增殖作用，和流式細胞儀測培養(yǎng)基內(nèi)含MPs-B1的K562細胞凋亡比例以研究其抑制腫瘤細胞生長的作用。 結果：熱水抽提、Sevag法除蛋白和乙醇沉淀制備得到貽貝多糖粗品(CrudeMytiluscoruscuspolysaccharides，CMPs)，呈淡黃色粉末狀，吸水性強，水溶解度佳。CMPs經(jīng)DEAE-ce

4、llulose52、SephacrylS-200HR柱層析得到半純品多糖MPs-A、MPs-B、MPs-C，再經(jīng)HPLC后分別分離并純化得到各個不同組分：MPs-A1/A2/B1/B2/B3/C1/C2/C3，均呈白色粉末狀，水溶性好。以硫酸—苯酚比色法、染料結合比色法、紫外光譜掃描法測定表明各個組分幾乎不含蛋白，凝膠過濾法(HPLC)提示除MPs-A2外其余組分均為均一組分，聚丙烯酰胺電泳層析則顯示七個組分均為均一組分。根據(jù)洗脫時間對

5、相對分子質量對數(shù)的標準曲線，MPs-A1/A2/B1/B2/B3/C1/C2/C3的相對分子量分別為3.8×104、4.139×103、3,51×103、5.2×104、4.168×103、4.22×103、6.85×104、5.50×104Da。紅外光譜分析顯示除MPs-A1的多糖紅外吸收特征光譜不是很明顯外其余三個組分均為結構較為復雜的雜多糖，MPs-B1為α-D-吡喃糖，MPs-C2和MPs-C3均為B型呋喃糖。從氣相色譜結果可知

6、MPs-A1僅含有葡萄糖；MPs-B1含有半乳糖和葡萄糖，二者摩爾比為39.07：60.93；MPs-C2含有半乳糖和葡萄糖，二者摩爾比為57.30：42.70。其中MPs-B1純度較高，1HNMR表明為α-型吡喃己糖，其二維結構正在進一步解析中。MPs-B1能提高原代培養(yǎng)大鼠睪丸支持細胞的存活率，增加K562細胞的凋亡率。 結論：經(jīng)工藝改進后獲得的MPs與同類和前期研究所報道的貽貝多糖在理化性質、含糖量、單糖組分上均有顯著區(qū)別