血紅素加氧酶-1在大鼠肢體缺血再灌注性肺損傷及預(yù)處理中的作用.pdf

1、目的：觀察血紅素加氧酶-1(hemeoxygenase-1，HO-1)在缺血預(yù)處理下對大鼠肢體缺血再灌注性肺損傷的變化，闡明缺血預(yù)處理肺保護(hù)作用的相關(guān)機(jī)制；進(jìn)一步闡述尿蛋白酶抑制劑(urinarytrypsininhibitor，UTI)與HO-1兩種內(nèi)源性保護(hù)系統(tǒng)的相互關(guān)聯(lián)，為該藥的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法：雄性SD大鼠64只，隨機(jī)分為四組：假手術(shù)組(S)，缺血再灌注組(I/R)缺血預(yù)處理組(IPR)及尿蛋

2、白酶抑制劑（烏司他丁）預(yù)處理組(UTI)。假手術(shù)組(S，n=16)：僅鈍性分離雙側(cè)腹股溝三角處股動脈，不予夾閉，作為時(shí)間對照，術(shù)中使用公斤體重1/3-1/2的水合氯醛維持麻醉至無體動反應(yīng)。缺血再灌注組(I/R，n=16)：股動脈夾閉前30分鐘頸內(nèi)靜脈給予生理鹽水1ml作為溶劑對照。制作雙下肢缺血2小時(shí)、再灌注2小時(shí)(n=8)和4小時(shí)(n=8)模型。缺血預(yù)處理組(IPR，n=16)：股動脈夾閉前30分鐘實(shí)施缺血5分鐘、再灌注5分鐘，循環(huán)3

3、次后余同I/R組。烏司他丁處理組(UTI)：股動脈夾閉前30分鐘，頸內(nèi)靜脈給予公斤體重50000U的烏司他丁，再灌注前10分鐘再給予公斤體重50000U的烏司他丁，余同I/R組。分別于再灌注2小時(shí)和4小時(shí)末取大鼠左肺組織制備石蠟標(biāo)本，行組織學(xué)檢查及用免疫組化法測定HO-1的半定量和定位表達(dá)(n=8)，新鮮肺組織測量濕/干比，免疫印跡法測右肺組織HO-1蛋白表達(dá)水平(n=8)。
　　 結(jié)果：
　　 1、形態(tài)學(xué)變化：I/R組

4、可見肺組織水腫、毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、血管周圍間隙增大、肺間質(zhì)有大量的炎癥細(xì)胞浸潤，部分肺泡腔可見出血，并伴局部肺不張。IPR組及UTI組的肺組織損傷病理改變明顯減輕，較S組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2、肺水腫：I/R組肺組織肺濕/干比明顯增加，形態(tài)學(xué)也可見間質(zhì)水腫表現(xiàn)，與S組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IPR組及UTI組兩組再灌注2、4小時(shí)肺濕/干比都較I/R組明顯減少（P＜0.05），再灌注4小時(shí)更為明顯（P＜0.05），與S

5、組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3、HO-1表達(dá)的變化：免疫印跡：與S組相比，I/R組再灌注2、4小時(shí)可見HO-1保護(hù)蛋白有少量的表達(dá)（P＜0.01），IPR組及UTI組明顯上調(diào)HO-1的表達(dá)并達(dá)到保護(hù)肺損傷的作用（P＜0.01），與再灌注2小時(shí)相比，再灌注4小時(shí)仍可見其高表達(dá)狀態(tài)（P＜0.05）。免疫組化蛋白半定量表達(dá)結(jié)果與免疫印跡相符合，并可觀察到HO-1表達(dá)的位置主要在肺支氣管上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞，肺泡上皮細(xì)胞