模擬航空正加速度(+10Gz)下大鼠肝臟組織中氧化應(yīng)激反應(yīng)及NF-κB的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:1.建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，模擬航空正加速度(+10Gz)重復(fù)作用后，觀察不同時(shí)間段大鼠肝臟生理變化及行為活動(dòng)的改變;2.研究+10Gz水平的重復(fù)持續(xù)性加速度(+Gz)對(duì)肝臟組織大體病理變化:3.觀察+10Gz水平的重復(fù)持續(xù)性正加速度(+Gz)對(duì)肝臟細(xì)胞參與氧化還原反應(yīng)物質(zhì)的作用關(guān)系;4.研究重復(fù)持續(xù)性正加速度(+Gz)+10Gz水平的重復(fù)作用下大鼠肝臟組織NF-κB及表達(dá)變化。
　　方法:中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院提供SD大鼠24

2、只，于解放軍304醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)1周，適應(yīng)環(huán)境，排除其他因素的影響，統(tǒng)計(jì)學(xué)原理隨機(jī)分為四組，每組6只（n=6），分別為空白對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)A、B、C組，分別為實(shí)驗(yàn)離心作用后0.5h、24h、48h三組。采取中國(guó)人民解放軍航空研究所自主研制的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物離心機(jī)模型（離心機(jī)半徑2m），采用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)自主控制（加速度控制增長(zhǎng)率0.5G/s，峰值作用+10Gz，間隔0.5h，作用周期5次），實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(control)未做離心加速度實(shí)驗(yàn)。具體方法參

3、考本課題組已發(fā)文章[1]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立后應(yīng)用10％水合氯醛麻醉，剖腹取下腔靜脈血測(cè)定血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT);同時(shí)留取肝臟標(biāo)本，液氮保存?zhèn)錅y(cè)超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)濃度;免疫組化、Western blotting檢測(cè)NF-κB蛋白的分別與表達(dá)。
　　結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，與空白對(duì)照組相比，加速度離心作用第1、2個(gè)周期，實(shí)驗(yàn)組大鼠焦躁不安，皮毛散亂，大、

4、小便排出，離心間斷期，大鼠活動(dòng)減少，不主動(dòng)進(jìn)食，不配合實(shí)驗(yàn)。離心第3、4個(gè)周期時(shí)，三組大鼠上述現(xiàn)象逐漸加重。離心第5個(gè)周期，各組大鼠無(wú)自主活動(dòng)，配合實(shí)驗(yàn)，暫無(wú)抵抗能力。離心作用結(jié)束后，觀察各組大鼠，與對(duì)照組相比，A組大鼠毛發(fā)蓬亂，不進(jìn)食水，靜臥不動(dòng);B組大鼠毛發(fā)散亂，稍進(jìn)食、水，活動(dòng)量減少;C組大鼠毛發(fā)順暢但少光澤，已正常進(jìn)食、水，四處活動(dòng)。2.與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)各組轉(zhuǎn)氨酶水平均升高，且在ALT、AST表達(dá)水平上，B組高于A組和C組(P

5、＜0.05)，但A組和C組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。3.與對(duì)照組相比，在SOD、GSH-Px的表達(dá)水平上，實(shí)驗(yàn)組B組較低(P＜0.05)，但實(shí)驗(yàn)組A、C組則差別不大(P＞0.05);然而，在MDA的表達(dá)水平上，實(shí)驗(yàn)組B組高于對(duì)照組(P＜0.05)，但實(shí)驗(yàn)組A、C組與對(duì)照組相比則差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);4.免疫組化和Western blotting結(jié)果證實(shí)如下，觀察免疫組化切片發(fā)現(xiàn)，肝組織細(xì)胞內(nèi)NF-κB陽(yáng)性表達(dá)不

6、僅見(jiàn)于實(shí)驗(yàn)大鼠肝細(xì)胞內(nèi)，也見(jiàn)于組織的炎性細(xì)胞和肝臟的Kupffer細(xì)胞內(nèi)，可分為胞質(zhì)型、核型、核漿型等三個(gè)類型，單獨(dú)或混合存在。+Gz重復(fù)持續(xù)暴露下大鼠肝臟NF-κB表達(dá)水平明顯升高，實(shí)驗(yàn)組大鼠肝組織中NF-κB表達(dá)率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組NF-κB表達(dá)水平呈明顯下降趨勢(shì)(P＜0.05)。B組肝組織中NF-κB表達(dá)水平最高，對(duì)照組最低，且B組明顯高于A組(P＜0.05)。A組和C組，B組和C組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:本課題組前階段實(shí)驗(yàn)研究已發(fā)現(xiàn)模擬航空環(huán)境下重復(fù)持續(xù)性低正加速度(低于+6Gz)對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞影響不大且能自我修復(fù)，然而（高于+6Gz）對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)激性損傷，在不同程度上造成大鼠肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷。損傷機(jī)制涉及多個(gè)即早基因和蛋白的表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)損傷機(jī)制可能涉及氧化應(yīng)激反應(yīng)物質(zhì)SOD、GSH-Px及MDA三者的相互作用;同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，模擬航空正加速度(+10Gz)暴露下大鼠肝臟組織中NF-κB