重組脂聯(lián)素對氧化應(yīng)激狀態(tài)下內(nèi)皮細胞NF-κB、iNOS和NO信號表達的影響.pdf

1、目的：研究NF-κ B-iNOS-NO信號通路在第三丁基過氧化氫(Tert-butylhydroperoxide，t-BHP)誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷中的作用，在此基礎(chǔ)上進一步研究重組脂聯(lián)素對氧化應(yīng)激狀態(tài)下內(nèi)皮細胞的NF-κ B-iNOS-NO信號表達的影響。 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)，用t-BHP誘導(dǎo)刺激，模擬體外內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激損傷的細胞模型，通過MTT法觀察t-BHP作用后細胞的存活率，Griess化學(xué)顯色法檢

2、測氧化損傷過程中細胞內(nèi)NO水平，同時應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測胞漿及胞核核因子κB片段p65(NF-κ Bp65)蛋白、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)蛋白表達水平的變化。應(yīng)用iNOS抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯(NG-Nitro-L-arginine Methyl Ester，L-NAME)預(yù)處理并檢測細胞內(nèi)NO水平。隨后用含脂聯(lián)素基因的重組腺病毒處理，(選MOI10

3、0，作用時間48h)觀察重組脂聯(lián)素對t-BHP誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷的保護作用。 結(jié)果：MTT顯示t-BHP(12.5-100umol/L)作用不同時間(30-120min)后可明顯抑制內(nèi)皮細胞的生長，并呈現(xiàn)一定的時效和量效關(guān)系，50umol/L濃度的t-BHP處理60min時胞漿iNOS蛋白達高峰水平，處理30min時胞核NF-κB活化片段p65蛋白達高峰水平，iNOS抑制劑L-NAME(600umol/L)預(yù)處理細胞24h后可明顯

4、抑制內(nèi)皮細胞胞內(nèi)NO水平的升高。加入含脂聯(lián)素基因的重組腺病毒處理，(選MOI100，作用時間48h)干預(yù)處理后可抑制t-BHP誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞胞內(nèi)NO水平的升高，并且重組脂聯(lián)素能抑制t-BHP誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞胞核NF-κBp65及胞漿iNOS蛋白的表達水平。 結(jié)論：(1)t-BHP可抑制內(nèi)皮細胞的生長，在次過程中伴隨細胞內(nèi)NO水平的升高，(2)氧化應(yīng)激NF-κB-iNOS-NO信號通路可能是t-BHP誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞發(fā)生損傷的重要通路之