黃連素等純中藥成分對(duì)氟康唑抗非白色念珠菌的增敏作用與機(jī)制研究.pdf

1、背景:艾滋病及惡性腫瘤患者的增多，導(dǎo)尿管或靜脈置管及內(nèi)鏡微創(chuàng)診療技術(shù)的開展，高效廣譜抗生素以及器官移植術(shù)后免疫抑制劑和激素的應(yīng)用，導(dǎo)致真菌已成為院內(nèi)感染的重要致病菌。臨床上廣泛應(yīng)用氟康唑作為真菌感染的預(yù)防和治療一線用藥，這使得非白色念珠菌的臨床分離率逐漸上升，它們對(duì)氟康唑具有較高的固有耐藥或獲得性耐藥，其中有較高的獲得耐藥性的光滑念珠菌的臨床檢出率占所有念珠菌的第二位，對(duì)氟康唑天然耐藥的克柔念珠菌檢出率雖不高，但它們給非白色念珠菌感染的

2、治療帶來了挑戰(zhàn)，引起人們的關(guān)注和重視。綜合非白色念珠菌的高耐藥性和逐年升高的檢出率，本課題選擇對(duì)氟康唑耐藥的光滑念珠菌和克柔念珠菌作為研究對(duì)象。目前臨床上可用抗真菌藥物品種有限，昂貴的價(jià)格或藥物本身的毒性，限制了它們?cè)谂R床上的應(yīng)用，而開發(fā)一種新的抗真菌藥物耗時(shí)耗資巨大。因此，越來越多的研究者致力于抗真菌藥物和中藥成分的聯(lián)合應(yīng)用研究，旨在發(fā)現(xiàn)能夠?qū)Ψ颠蚩鼓退幏前咨钪榫哂性鲂ё饔玫闹兴幊煞?，逆轉(zhuǎn)非白色念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥性。
　

3、　目的:本研究旨在評(píng)價(jià)氟康唑分別和黃連素、土槿皮乙酸、紫草素、丁香酚、黃芩苷、沒食子酸聯(lián)合對(duì)耐氟康唑的光滑念珠菌和克柔念珠菌的體外靜態(tài)和動(dòng)態(tài)抗真菌作用，并探索其協(xié)同作用可能的機(jī)制。
　　方法:根據(jù)M27-A3抗真菌藥物敏感性測(cè)定方案，篩選出對(duì)氟康唑耐藥的光滑念珠菌和克柔念珠菌，分別采用棋盤法和時(shí)間-殺菌曲線法研究氟康唑和各中藥成分聯(lián)合對(duì)耐氟康唑的光滑念珠菌和克柔念珠菌的體外靜態(tài)和動(dòng)態(tài)抗真菌作用。以肉眼觀察和用酶標(biāo)儀在492nm波長(zhǎng)

4、下測(cè)定吸光度兩種方法測(cè)定兩藥聯(lián)合作用于浮游菌24h的MIC值及作用于生物膜24h時(shí)的SMIC值，兩藥聯(lián)合對(duì)浮游菌以及生物膜的作用效果利用部分抑菌濃度指數(shù)(FICI)和生長(zhǎng)率差值法（ΔE）加以評(píng)價(jià);將菌懸液暴露于受試藥物后的第0，6，12，24和48h通過菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，橫坐標(biāo)設(shè)為菌懸液暴露于受試藥物后的時(shí)間、縱坐標(biāo)設(shè)為1mL菌懸液菌落數(shù)的常用對(duì)數(shù)值，利用得到的時(shí)間-殺菌曲線來評(píng)價(jià)藥物聯(lián)合的動(dòng)態(tài)作用效果;藥物聯(lián)合抗真菌作用機(jī)制研究方面初步

5、探討有效中藥成分沒食子酸對(duì)光滑念珠菌和克柔念珠菌耐藥株生物膜形成的早期黏附性的影響，以及評(píng)估了鈣通道阻滯劑對(duì)沒食子酸增加氟康唑抗耐藥光滑念珠菌和克柔念珠菌敏感性的影響。
　　結(jié)果:受試中藥成分單用抗真菌作用結(jié)果表明，土槿皮乙酸、丁香酚單用時(shí)對(duì)耐氟康唑的光滑念珠菌和克柔念珠菌幾乎沒有抗非白色念珠菌作用（MIC80值為128～256μg/mL），紫草素、黃芩苷、沒食子酸僅表現(xiàn)出較弱的抗非白色念珠菌作用（MIC80值為16～64μg/m

6、L），黃連素單用時(shí)表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗非白色念珠菌作用（MIC80值為2～8μg/mL）。
　　受試中藥成分與氟康唑聯(lián)用結(jié)果表明，黃連素、土荊皮乙酸、紫草素、丁香酚與氟康唑聯(lián)用時(shí)均表現(xiàn)出無關(guān)作用;黃芩苷與氟康唑聯(lián)用時(shí)對(duì)耐藥的克柔念珠菌菌株呈現(xiàn)出較強(qiáng)的協(xié)同作用;而沒食子酸與氟康唑聯(lián)用時(shí)對(duì)耐藥的光滑念珠菌和克柔念珠菌均呈現(xiàn)出顯著的協(xié)同作用，氟康唑的MIC值降為單用時(shí)的1/4～1/8，F(xiàn)ICI值為0.375，即沒食子酸能增加耐氟康唑的光滑念珠

7、菌和克柔念珠菌對(duì)氟康唑的敏感性;量效關(guān)系結(jié)果也證實(shí)隨著沒食子酸的濃度增加，增效作用也越來越大。
　　時(shí)間殺菌曲線實(shí)驗(yàn)表明，與氟康唑單用組相比，沒食子酸與氟康唑聯(lián)用在24h時(shí)對(duì)1mL光滑念珠菌和克柔念珠菌分別下降了2.1和2.25個(gè)單位的菌懸液CFU的常用對(duì)數(shù)值，進(jìn)一步證明了兩藥的協(xié)同作用。
　　本實(shí)驗(yàn)還證明了沒食子酸對(duì)耐氟康唑的光滑念珠菌和克柔念珠菌生物膜形成的早期黏附有明顯的抑制作用，初步探討了沒食子酸對(duì)氟康唑增效作用的機(jī)

8、制。
　　結(jié)論:黃連素在單用時(shí)表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗非白色念珠菌作用，但與氟康唑聯(lián)用時(shí)卻表現(xiàn)出無關(guān)作用，關(guān)于黃連素的抗非白色念珠菌的活性值得進(jìn)一步的研究。氟康唑和沒食子酸聯(lián)用對(duì)耐氟康唑的光滑念珠菌和克柔念珠菌的浮游狀態(tài)和生物膜均表現(xiàn)出協(xié)同作用，且沒食子酸能夠明顯抑制非白色念珠菌生物膜形成的早期黏附。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明沒食子酸可有效的逆轉(zhuǎn)受試非白色念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥性，這對(duì)于預(yù)防和治療臨床上與導(dǎo)管相關(guān)的非白色念珠菌感染有重要的意義。本研究為抗