光滑念珠菌對(duì)氟康唑耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目的:由于廣譜抗生素的廣泛使用、免疫缺陷人群的增多等,使得臨床真菌感染的發(fā)病率不斷上升,念珠菌是醫(yī)院感染的常見致病性真菌,近年來(lái)光滑念珠菌引起的真菌感染明顯增多,由于光滑念珠菌對(duì)臨床常用的三唑類抗真菌藥物敏感性差,其耐藥現(xiàn)象已成為臨床治療的難題。
　　 本研究收集臨床分離的光滑念珠菌,檢測(cè)其對(duì)氟康唑的耐藥性,并對(duì)三唑類藥物作用靶酶的編碼基因ERG11和外排泵基因CDR1、CDR2和MDR1進(jìn)行研究,以了解光滑念珠菌對(duì)氟康唑耐藥的

2、機(jī)制,為臨床合理使用抗真菌藥物提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 1：收集臨床分離的光滑念珠菌98株,用M44-P紙片擴(kuò)散法和M27-4微量稀釋法檢測(cè)光滑念珠菌對(duì)氟康唑的敏感性,以了解光滑念珠菌的耐藥狀況。
　　 2：采用PCR技術(shù)對(duì)光滑念珠菌的靶酶基因ERG11編碼區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增,并對(duì)目的基因進(jìn)行雙向測(cè)序,測(cè)序結(jié)果與網(wǎng)上公布的標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì),以研究ERG11基因突變與耐藥之間的關(guān)系。
　　 3：采用半定量RT-P

3、CR技術(shù),檢測(cè)氟康唑耐藥株與敏感株靶酶基因ERG11、外排泵基因CDR1、CDR2和MDR1的mRNA表達(dá)情況,以研究基因表達(dá)與耐藥之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1：98株光滑念珠菌中,8株對(duì)氟康唑耐藥,耐藥率為8.16％;劑量依賴性敏感株15株,所占比例為15.31％;敏感株75株,所占比例為79.53％。98光滑念珠菌對(duì)兩性霉素B和5-氟胞嘧啶敏感率均為100％,8株耐藥株全部對(duì)伊曲康唑耐藥,其中3株對(duì)伏立康唑耐

4、藥。
　　 2：對(duì)ERG11基因的編碼區(qū)進(jìn)行測(cè)序,其結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)后發(fā)現(xiàn)光滑念珠菌耐藥株和敏感株的ERG11基因共有8個(gè)點(diǎn)突變,分別為T866A、C1103T、T1280C、A1325G、C1640T、G1661A、T1931A和A2042G,均為同義突變,不引起所編碼氨基酸的改變,其中5個(gè)點(diǎn)突變?cè)诿舾兄旰湍退幹曛芯霈F(xiàn),分別為C1103T、T1280C、A1325G、C1640T和G1661A,2個(gè)點(diǎn)突變只出現(xiàn)在耐藥株

5、中,分別為T866A和A2042G,1個(gè)點(diǎn)突變只出現(xiàn)在敏感株中,為T1931A。
　　 3：將耐藥株與敏感株的ERG11、CDR1、CDR2和MDR1基因mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行比對(duì),比對(duì)中發(fā)現(xiàn),ERG11、CDR1和CDR2基因mRNA在耐藥株中的表達(dá)均高于敏感株,MDR1基因mRNA的表達(dá)在耐藥株與敏感株之間沒有顯著性差異。
　　 結(jié)論:
　　 1：研究表明光滑念珠菌對(duì)氟康唑的耐藥率為8.16％,并且三唑類藥物