黃連堿介導LPS-TLR-4通路降低飲食誘導肥胖型金黃地鼠體重的研究.pdf

1、肥胖是一種低度的、系統(tǒng)性的慢性炎癥。它具體表現(xiàn)于一定程度上的明顯超重或脂肪層過厚，尤其是指體內(nèi)甘油三酯積聚過多而導致的一種狀態(tài)。肥胖會誘發(fā)機體代謝系統(tǒng)發(fā)生改變，從而引起人體病理、生理改變或潛伏。肥胖會導致疾病、危害健康。它是誘發(fā)糖尿病、冠心病、脂肪肝、高血壓、中風和關(guān)節(jié)炎等疾病的高危因素，也與胰腺癌等癌癥發(fā)病率上升有關(guān)。它不僅影響人們的生活質(zhì)量，也給社會公共衛(wèi)生服務系統(tǒng)帶來沉重負擔。目前，臨床治療肥胖除了飲食控制、加強鍛煉外，還有藥物治

2、療。臨床上的減肥藥物普遍具有耐藥性和相對較多的毒副作用，并且其治療效果也不盡如人意。因而研究開發(fā)一種新的減肥藥物也迫在眉睫。長期以來，中藥治療肥胖有著悠久的歷史，黃連作為降脂減肥藥物一直被廣泛應用于臨床治療當中?，F(xiàn)代研究表明，黃連解毒湯能有效改善Ⅱ型糖尿病患者的BMI指數(shù)。黃連主要成份之一的小檗堿，其能影響腸道菌群，下調(diào)機體LPS水平，降低機體炎癥，緩解肥胖癥狀。在黃連中，同樣作為異喹啉類衍生物的黃連堿與小檗堿具有相似的生理活性，它們都

3、具有抗菌、降血糖、降血脂等作用。最近的研究發(fā)現(xiàn)黃連堿具有降血脂和降低體重的功效。因此，本課題主要針對黃連堿對肥胖型老鼠降低體重的作用及其潛在機制進行初步探究。
　　本課題的主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　?。?）初步探究黃連堿降低高脂高膽固醇飲食誘導的肥胖型金黃地鼠體重的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高脂高膽固醇飲食可以誘導體重、血脂（TC、LDL-c、VLDL-c）、TG和ApoB水平的顯著增加。在給藥一個月后，發(fā)現(xiàn)各組進食量無明顯變化。黃連堿具

4、有良好的減輕體重和降血脂的活性。尤其是高劑量黃連堿能有效改善肥胖型金黃地鼠的Lee’s指數(shù)，能分別顯著降低模型組血清中的TC、TG、LDL-c、VLDL-c以及ApoB的水平，分別達到27.6％、10.0%、21.7%、36.2%和23.8%（P<0.01或P<0.05）。此外，高劑量的黃連堿還能顯著升高HDL-c和胰島素的水平（P<0.05）。
　　（2）在探索黃連堿對高脂高膽固醇飲食誘導的肥胖型金黃地鼠的肝重和脂肪組織重實驗中

5、發(fā)現(xiàn)，每日給藥70.05mg/kg的高劑量黃連堿能極顯著的減少腎周脂肪和附睪脂肪的累積，肝重也顯著降低。另外，肝臟油紅O染色實驗表明，黃連堿高劑量能緩解脂肪肝的癥狀，可明顯降低肝臟組織中脂滴的數(shù)目和大小。附睪脂肪組織HE染色實驗表明，高劑量黃連堿能抑制脂肪細胞的擴大。說明黃連堿降低體重可能是抑制了脂肪細胞的大小而不是數(shù)量。
　　（3）采用ELISA試劑盒以及實時熒光定量PCR方法檢測內(nèi)毒素和炎癥相關(guān)蛋白及mRNA相對水平。結(jié)果表示

6、高劑量黃連堿能有效降低模型組金黃地鼠血清中LPS、LBP、IL-6和TNF-α水平。同時其也能顯著降低肝臟中TLR-4和CD14的蛋白及mRNA的表達水平。通過LPS對LBP和炎癥因子作皮爾森相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清中LPS的含量與LBP、TNF-α及IL-6水平呈強正相關(guān)。這說明高劑量黃連堿能緩解肥胖型金黃地鼠血清中LPS水平，能有效抑制LPS/TLR-4通路，減少炎癥因子分泌，從而緩解機體炎癥狀況。
　?。?）采用乳果糖/甘露醇法

7、測定腸道通透性，發(fā)現(xiàn)高脂高膽固醇飲食能使金黃地鼠腸道通透性增加，而高劑量黃連堿能反轉(zhuǎn)該情況。
　?。?）初步探究黃連堿對高脂高膽固醇飲食誘導肥胖型C57BL/6J小鼠腸道菌群的影響，發(fā)現(xiàn)肥胖型C57BL/6J小鼠較正常體重小鼠而言，其腸道菌群種類減少，變形菌門類腸道微生物顯著增加。較肥胖型C57BL/6J小鼠而言，在黃連堿的作用之下，變形菌門腸道微生物的相對豐度下降達40.0%，小鼠體重也降低了22.0%（P<0.05）。說明黃連

8、堿能改善由高脂高膽固醇飲食誘導的肥胖型小鼠體內(nèi)腸道菌群種類和數(shù)量的變化，降低屬于革蘭氏陰性菌的相對豐度，減少肥胖型C57BL/6J小鼠的體重。
　?。?）黃連堿體外對陰溝腸桿菌的抑菌實驗和抗內(nèi)毒素實驗結(jié)果表明，黃連堿對屬于變形菌門的陰溝腸桿菌的最小抑菌濃度為60μg/mL。4μg/mL的黃連堿即有顯著性的抗內(nèi)毒素活性。說明黃連堿對陰溝腸桿菌有較好抑菌效果并能降低內(nèi)毒素的毒性。
　　總之，黃連堿是一種潛在的抗肥胖藥物。其作用機