基于TLR4通路的黃連堿、蘆薈大黃素抗炎作用機制研究.pdf

1、目的：本研究以黃連堿、蘆薈大黃素為研究對象，以內(nèi)毒素（LPS）誘導的小鼠RAW264.7巨噬細胞為實驗模型，通過考察兩藥對炎癥因子及TLR4介導的炎癥通路下游蛋白表達的影響，探討蘆薈大黃素、黃連堿的體外抗炎活性及作用機制。
　　方法：
　?。?）以LPS為誘導劑，刺激小鼠RAW264.7巨噬細胞，建立炎癥細胞模型；
　?。?）Griss法檢測細胞培養(yǎng)上清液中一氧化氮（NO）的含量；
　　（3）ELISA法檢測細胞

2、培養(yǎng)上清液中白介素-6（IL-6）的含量；
　?。?）qRT-PCR技術檢測細胞中誘導性一氧化氮合酶（iNOS）、白介素-1β（IL-1β）、IL-6的基因表達；
　?。?）Western Blot技術檢測細胞中IκBα、ERK1/2、JNK、p38和Akt蛋白的表達。
　　結果：
　?。?）蘆薈大黃素5μM、10μM、20μM劑量組和黃連堿1μM、10μM、30μM劑量組對RAW264.7巨噬細胞NO和IL-6

3、的釋放量具有顯著抑制作用（p<0.001），抑制作用隨劑量增加而增強。
　　（2）黃連堿1μM、10μM、30μM劑量組對iNOS、IL-1β、IL-6的基因表達均有顯著抑制作用（p<0.001），對IL-1β、IL-6的基因表達呈濃度依賴關系。蘆薈大黃素5μM、10μM、20μM劑量組對iNOS及IL-6的基因表達具有顯著抑制作用（p<0.001），并且具有濃度依賴性。蘆薈大黃素在10μM、20μM時對IL-1β的基因表達表現(xiàn)出

4、顯著抑制作用（p<0.01）。
　　（3）蘆薈大黃素和黃連堿各劑量組均抑制IκBα蛋白降解。黃連堿1μM組IκBα表達量與空白組相當，與模型組無差異（p>0.05），10μM組和30μM組表達量較高，與模型組有顯著性差異（p<0.05）；蘆薈大黃素5μM組IκBα表達量與空白組相當，10μM組和20μM組表達量升高，與模型組有顯著性差異（p<0.001）。
　?。?）黃連堿對ERK1/2、JNK、p38蛋白磷酸化均有抑制作用

5、。對ERK1/2蛋白，1μM組與模型組無顯著性差異（p>0.05），10μM組和30μM組與模型組有著差異（p<0.01），抑制作用呈劑量依賴性；對JNK蛋白，各劑量組與模型組均有顯著差異（p<0.01），呈劑量依賴性；對p38蛋白，1μM組表達量略高，10μM組表達量與陽性組相當，30μM組表達量明顯降低（p<0.01）。
　　（5）各劑量蘆薈大黃素對ERK1/2蛋白、JNK蛋白、p38蛋白的磷酸化均有抑制作用，與模型組比較有顯

6、著性差異（p<0.001），抑制作用呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。
　?。?）黃連堿各劑量組均顯著抑制Akt蛋白的磷酸化，與模型組比較具有顯著差異（p<0.01），抑制作用呈濃度依賴性；各劑量蘆薈大黃素對Akt蛋白的磷酸化均有抑制作用，與模型組有顯著差異（p<0.001），呈一定的濃度依賴性。
　　結論：
　　（1）蘆薈大黃素和黃連堿可在轉錄水平抑制炎性細胞因子IL-6、IL-1β及NO合成酶的表達，表現(xiàn)出較好的抗炎活性。

7、r>　　（2）蘆薈大黃素的抗炎作用機制與TLR4介導的信號通路MyD88依賴途徑下游多條信號通路有關，可減少IκBα蛋白磷酸化降解，降低MAPK家族ERK、JNK、p38蛋白及Akt蛋白的磷酸化水平，從而發(fā)揮阻斷信號傳導，抑制炎癥反應發(fā)生的作用。
　　（3）黃連堿的抗炎作用機制與TLR4介導的信號通路MyD88依賴途徑下游的NF-κB信號通路及PI3K/Akt信號通路最為密切，對MAPK家族JNK及p38通路相關性較大，與ERK通