肥胖大鼠袖狀胃切除術(shù)后腸源性脂多糖的變化及其相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　減重手術(shù)是治療肥胖及其相關(guān)代謝綜合征的有效方法之一，但目前手術(shù)減重的作用機(jī)制仍未完全明確。近來(lái)的研究表明，腸源性脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)作為革蘭陰性菌細(xì)胞壁的組成部分，在參與脂肪乳糜微粒吸收、促成胰島素抵抗等方面起到重要作用。本研究通過(guò)檢測(cè)肥胖大鼠腸道菌群中革蘭陰性菌所含脂多糖在參與袖狀胃切除手術(shù)的過(guò)程中的代謝變化及體內(nèi)分布情況探究其可能的相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法：
　　（1）

2、肥胖大鼠模型建立、分組及術(shù)式確立：6周齡雄性SD大鼠80只，手術(shù)組（n=20）、假手術(shù)組（n=20）及練習(xí)組（n=30）喂養(yǎng)高脂飼料，正常對(duì)照組（n=10）喂養(yǎng)普通飼料。喂養(yǎng)時(shí)間均為8周，每日攝食量不作限制。8周后測(cè)量大鼠體重、體長(zhǎng)、糖耐量及胰島素抵抗水平。手術(shù)組行袖狀胃切除術(shù)，殘胃容積參照臨床常用袖狀胃切除術(shù)切除范圍，按術(shù)后處死時(shí)間分為術(shù)后1周組（n=5）、術(shù)后2周組（n=5）、術(shù)后3周組（n=5）及術(shù)后4周組（n=5）。假手術(shù)組行剖

3、腹探查術(shù)，分組同手術(shù)組。
　?。?）手術(shù)質(zhì)量評(píng)價(jià)及學(xué)習(xí)曲線研究：從手術(shù)時(shí)間、術(shù)中出血量等方面評(píng)價(jià)手術(shù)質(zhì)量，繪制學(xué)習(xí)曲線圖，總結(jié)術(shù)中及術(shù)后各方面的因素，歸納大鼠手術(shù)死亡原因，為建模成功提供有價(jià)值的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)。
　?。?）大鼠體重變化曲線：手術(shù)組及假手術(shù)組術(shù)后每?jī)扇諟y(cè)量大鼠體重，繪制體重變化曲線，行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　（4）大鼠糞便革蘭染色：取手術(shù)組及假手術(shù)組中4周組大鼠其術(shù)前及術(shù)后糞便行革蘭染色，計(jì)算其革蘭陽(yáng)性菌及陰性菌菌群

4、比例。
　?。?）大鼠血清LPS水平：于術(shù)前及術(shù)后每周定時(shí)抽取手術(shù)組及假手術(shù)組大鼠尾靜脈血液，通過(guò)大鼠脂多糖酶聯(lián)免疫檢測(cè)法定量檢測(cè)其血漿LPS水平，行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　?。?）大鼠肝臟及腹腔脂肪LPS分布：處死大鼠時(shí)，取手術(shù)組及假手術(shù)組肝臟組織、腸系膜脂肪、腎周脂肪、附睪脂肪等組織各100mg，以9倍生理鹽水研磨為組織勻漿，將研磨液離心后取上清，通過(guò)大鼠脂多糖酶聯(lián)免疫檢測(cè)法定量檢測(cè)其LPS水平，行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　?。?）

5、大鼠葡萄糖耐量試驗(yàn)及胰島素抵抗水平：術(shù)前及術(shù)后對(duì)各組大鼠行糖耐量試驗(yàn)及胰島素抵抗水平檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：
　?。?）手術(shù)組大鼠體重超過(guò)正常對(duì)照組大鼠31.38％，假手術(shù)組大鼠體重超過(guò)正常對(duì)照組大鼠29.74%；且體長(zhǎng)、糖耐量水平及胰島素抵抗水平高脂喂養(yǎng)大鼠與對(duì)照組存在明顯差異（p＜0.0001）。肥胖及胰島素抵抗大鼠動(dòng)物模型建立成功。
　?。?）手術(shù)時(shí)間是影響大鼠術(shù)中及術(shù)后存活率的第一因素，一般應(yīng)控

6、制在50分鐘以內(nèi)。在所有死亡大鼠中，因手術(shù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致大鼠死亡達(dá)31.82%。
　?。?）術(shù)后手術(shù)組與假手術(shù)組大鼠體重均出現(xiàn)下降，但假手術(shù)組大鼠之后體重逐漸回升，且超過(guò)術(shù)前水平。手術(shù)組大鼠體重自術(shù)后開始呈進(jìn)行性下降，后逐漸趨于穩(wěn)定，體重降低水平與假手術(shù)組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.0001）。
　　（4）在隨機(jī)選取的油鏡下視野中，與假手術(shù)組相比，手術(shù)組大鼠術(shù)后革蘭陽(yáng)性菌數(shù)量增多（p＜0.0001），革蘭陰性菌數(shù)量減少（p

7、＜0.0001）。
　?。?）術(shù)前手術(shù)組與假手術(shù)組大鼠血清LPS水平無(wú)明顯差異（p=0.5226）；術(shù)后兩組大鼠血清LPS均有不同程度升高；之后手術(shù)組大鼠血清LPS水平出現(xiàn)明顯下降，而假手術(shù)組大鼠血清LPS水平則開始回升超過(guò)術(shù)前水平，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.0026）。且兩組大鼠血漿LPS水平與其取血當(dāng)時(shí)的體重水平具有顯著的直線相關(guān)性（p=0.0004）。
　?。?）手術(shù)組大鼠及假手術(shù)組大鼠各期肝臟組織中LPS含量無(wú)明

8、顯區(qū)別（手術(shù)組p=0.1548，假手術(shù)組p=0.7595）；手術(shù)組大鼠腎周脂肪、附睪脂肪、腸系膜脂肪組織中LPS水平隨術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)呈梯度降低趨勢(shì)；反觀假手術(shù)組大鼠腹腔脂肪組織中LPS水平與術(shù)后時(shí)間則無(wú)明顯關(guān)系，始終處于較為穩(wěn)定的水平。至術(shù)后第28天，與假手術(shù)組相比，手術(shù)組大鼠腹腔脂肪中LPS水平明顯降低（腎周脂肪p=0.0002，附睪脂肪p＜0.0001，腸系膜脂肪p=0.0101）。
　　（7）術(shù)后第28天，手術(shù)組大鼠糖耐量水

9、平及 HOMA-IR指數(shù)較術(shù)前明顯降低（p＜0.0001），而假手術(shù)組大鼠術(shù)后第28天則出現(xiàn)明顯升高（糖耐量p=0.0156、HOMA-IR p=0.0003）。兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.0001）。
　　結(jié)論：
　?。?）肥胖大鼠袖狀胃切除術(shù)后，大鼠體內(nèi)LPS水平的變化與其體重變化有密切關(guān)系，LPS水平的變化可能是其體重改變的原因之一。
　?。?）肥胖大鼠袖狀胃切除術(shù)后，由于大鼠體內(nèi)LPS水平及體重水平的降低，