基于納米材料的新型比色免疫分析及其在腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、隨著人口增長和老齡化進(jìn)程的加快，在過去的20年間，癌癥的發(fā)病率大大地增加。有效的疾病篩查和早期診斷越來越受到人們重視。因其特異性好、靈敏度高等特點(diǎn)免疫分析成為癌癥早期診斷的有效手段。但傳統(tǒng)的免疫分析方法本身的局限性大大限制了其進(jìn)一步應(yīng)用。例如，天然酶的昂貴及性質(zhì)脆弱不易保存；常規(guī)比色免疫分析的顯色結(jié)果是單一顏色從淺到深或從深到淺，當(dāng)光強(qiáng)度相近時(shí)，很難用肉眼區(qū)分。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴以兔IgG作為模型目標(biāo)分析物，采用三明治夾

2、心法構(gòu)建濃度依賴的多色轉(zhuǎn)變比色免疫分析。當(dāng)待測(cè)液中沒有兔IgG，納米金標(biāo)記的抗體不會(huì)連接到固相載體上，因而不會(huì)有納米金介導(dǎo)的銅沉積，加入顯色劑后也不會(huì)有普魯士藍(lán)生成，溶液顏色為黃色。隨著兔 IgG濃度的增大，越來越多的納米金被連接到固相載體上，因此越來越多的銅單質(zhì)被沉積到納米金表面，最后加入顯色劑后，會(huì)生成更多的普魯士藍(lán)。普魯士藍(lán)和K3Fe(CN)6以不同比例混合時(shí)，溶液的顏色會(huì)隨著普魯士藍(lán)濃度的增大逐漸的變?yōu)榫G色、藍(lán)綠色、藍(lán)色。即使在

3、待測(cè)物濃度相近時(shí)，這種濃度依賴的多種顏色的轉(zhuǎn)變更容易通過肉眼進(jìn)行區(qū)分，從而實(shí)現(xiàn)靈敏而準(zhǔn)確的半定量測(cè)定。也可通過測(cè)定708nm處的吸收值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)現(xiàn)未知樣品中兔 IgG的定量檢測(cè)。在最優(yōu)條件下，本實(shí)驗(yàn)獲得了兔 IgG的檢測(cè)線性范圍為1pgmL?1到100 ng mL?1，最低檢測(cè)限為0.27pgmL1。⑵通過水熱法制備了檸檬酸包被的磁性三氧化二鐵納米顆粒，并通過其表面的羧基與檢測(cè)抗體進(jìn)行耦聯(lián)以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的酶標(biāo)抗體。構(gòu)建三明治夾心免疫

4、分析法，以兔IgG作為模型蛋白。當(dāng)待測(cè)物中兔IgG越多，通過夾心免疫反應(yīng)連接到固相載體上的磁性納米粒子標(biāo)記的檢測(cè)抗體就越多。最后加入抗壞血酸（AA）、紅菲繞啉（BPT）作為顯色液，其中酸性且具有還原性的 AA腐蝕磁性納米顆粒，釋放少量亞鐵離子（Fe2+），F(xiàn)e2+進(jìn)一步與BPT形成紅色可溶性絡(luò)合物實(shí)現(xiàn)顯色。本體系中，隨著兔 IgG濃度的增大，更多的磁性納米粒子被捕獲，并生成更多的紅色絡(luò)合物，溶液顏色隨之逐漸加深，同時(shí)吸光值也隨之增大。在