急性肝損傷早期診斷指標(biāo)GSTA1的研究及保肝藥物初篩.pdf

1、隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，環(huán)境污染和食品藥品安全事件的頻頻高發(fā)，使肝臟疾病發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。肝損傷成為危害人類健康的重大疾病之一，急性肝損傷又是多種嚴(yán)重肝臟疾病發(fā)生、發(fā)展的始動(dòng)環(huán)節(jié)和共同途徑。因此，尋找早期、具有特異性的急性肝損傷指標(biāo)是本課題的研究目標(biāo)。本試驗(yàn)研究的GSTA1是Ⅱ相結(jié)合反應(yīng)同功酶GST的一個(gè)亞型。在編碼的二聚體蛋白時(shí)，是機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成部分?？梢源呋S多外源性化學(xué)物與GSH結(jié)合，促進(jìn)其在細(xì)胞內(nèi)降解清除，保護(hù)機(jī)體。明

2、確GSTA1在急性肝損傷中的變化將成為肝損傷標(biāo)記物的一個(gè)全新的階段。本試驗(yàn)在急性肝損傷的動(dòng)物模型和肝損傷標(biāo)記物的研究的基礎(chǔ)上，篩選化學(xué)性肝損傷的有效保肝藥物，為藥物性肝損傷和酒精性肝損傷保肝藥物的篩選奠定了基礎(chǔ)。
　　 本試驗(yàn)選用雄性昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，研究四氯化碳(CCl4)所致急性化學(xué)性肝損傷、醋氨酚(APAP)所致小鼠急性藥物性肝損傷、乙醇所致小鼠急性酒精性肝損傷GSTA1與ALT在時(shí)間-效應(yīng)和劑量-效應(yīng)上的關(guān)系。在本實(shí)驗(yàn)

3、室前期研究建立的三種急性肝損傷模型的基礎(chǔ)上，選定時(shí)間-效應(yīng)和劑量-效應(yīng)點(diǎn)，通過對(duì)GSTA1含量變化和ALT活性變化，進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)分析。GSTA1含量檢測(cè)原理為ELISA法，采用小鼠GSTA1試劑盒進(jìn)行;ALT活性檢測(cè)是通過比色法，用谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。在此基礎(chǔ)上通過三種藥物的作用效果確定急性化學(xué)性肝損傷的保肝藥物，以血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)、肝組織生化指標(biāo)(SOD、MDA、GSH、GSH-Px)、GSTA1的活性和含量分析進(jìn)行

4、評(píng)價(jià)。篩選出的有效藥物，以血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)、肝組織生化指標(biāo)(SOD、MDA、GSH、GSH-Px)、GSTA1的活性和含量及肝臟病理組織學(xué)進(jìn)行綜合分析評(píng)價(jià)，確定最佳用藥劑量。
　　 研究結(jié)果表明:
　　 1.化學(xué)性急性肝損傷:在時(shí)間-效應(yīng)試驗(yàn)中，經(jīng)CCl4口服處理6h，GSTA1含量變化與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01);經(jīng)CCl4口服處理16h，ALT活性變化與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05); GS

5、TA1含量變化和ALT活性變化在24 h達(dá)到最大值，之后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。在劑量-效應(yīng)試驗(yàn)中，當(dāng)CCl4濃度為0.125％時(shí)，GSTA1含量變化與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01);當(dāng)濃度為0.3％時(shí)，ALT活性變化與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01)。
　　 2.藥物性急性肝損傷:在時(shí)間-效應(yīng)試驗(yàn)中，經(jīng)APAP口服處理2h，GSTA1含量變化與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01); ALT活性變化與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0

6、.01)的時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)在經(jīng)APAP口服處理8 h;12 hGSTA1與ALT的變化量都達(dá)到最大值，之后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。在劑量-效應(yīng)試驗(yàn)中，當(dāng)APAP給藥劑量為100 mg·kg-1時(shí)，GSTA1含量變化與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01);當(dāng)給藥劑量為200 mg·kg-1時(shí)，ALT活性變化與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01)。
　　 3.酒精性急性肝損傷，在時(shí)間-效應(yīng)試驗(yàn)中，經(jīng)酒精口服處理2h，GSTA1含量變化與對(duì)照組相比差

7、異極顯著(P＜0.01);經(jīng)酒精口服處理8h，GSTA1與ALT的變化量都達(dá)到最大值，之后GSTA1含量變化呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，ALT活性變化在12h又出現(xiàn)了一個(gè)峰值。在劑量-效應(yīng)試驗(yàn)中，當(dāng)酒精劑量為10 mL·kg-1時(shí)，GSTA1含量變化與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01);當(dāng)給酒精劑量為14 mL·kg-1時(shí)，ALT活性變化與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01)。
　　 4.三種藥物保護(hù)作用的試驗(yàn)中，通過血清轉(zhuǎn)氨酶、肝組織生化

8、指標(biāo)及GSTA1的含量和活性進(jìn)行分析。與對(duì)照組相比:模型組差異極顯著(P＜0.01)說明模型建立成功;白芍總苷組和葡萄籽組差異極顯著(P＜0.01)，表明兩種藥物不能起到很好的保護(hù)作用;而龍葵組差異不顯著(P＞0.05)，且與陽性藥物組相比無顯著差異。因此在三種藥物保護(hù)作用的試驗(yàn)中確定龍葵為最佳藥物。
　　 5.龍葵最佳劑量確定試驗(yàn)中，通過血清轉(zhuǎn)氨酶、肝組織生化指標(biāo)、GSTA1的含量和活性及病理切片進(jìn)行分析。與對(duì)照組相比:龍葵中

9、、低劑量組差異極顯著(P＜0.01);而龍葵高劑量組差異不顯著(P＞0.05)，且與陽性藥物組相比無顯著差異。因此確定了龍葵的最佳劑量為150 mg·kg-1。
　　 本試驗(yàn)說明了在急性肝損傷模型中，GSTA1的含量變化在肝損傷早期、低濃度時(shí)就可檢測(cè)出來。作為肝損傷標(biāo)記物，GSTA1比ALT更準(zhǔn)確、敏感。因此，GSTA1可作為肝損傷的早期診斷指標(biāo)。同時(shí)本試驗(yàn)篩選出了急性化學(xué)性肝損傷的有效藥物龍葵并確定了最佳劑量，為其他兩組急性模