蜂膠對炎性疾病和炎癥微環(huán)境的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、炎癥是宿主系統(tǒng)受外界有害刺激時（如病原體、受損細(xì)胞或其他刺激物等）所產(chǎn)生的一系列保護(hù)性應(yīng)答事件，它通過影響機(jī)體微環(huán)境中多種細(xì)胞與因子而參與調(diào)控機(jī)體多種生理、病理過程。盡管炎癥本身并不被認(rèn)為是癌癥等復(fù)雜疾病的起始致病因素，但當(dāng)前已有越來越多的研究發(fā)現(xiàn)炎癥在很多復(fù)雜疾病的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中起重要作用。蜂膠是由蜜蜂(Apis mellifera)的工蜂采集植物樹脂等分泌物與其上顎腺、蠟腺等分泌物混合形成的膠粘性物質(zhì)，也是一種歷史十分悠久的傳統(tǒng)天然

2、藥物，具有廣泛的藥理學(xué)活性和生物學(xué)作用，其良好的抗炎效果，也是蜂膠最早受到關(guān)注的藥理學(xué)活性之一。基于本實(shí)驗(yàn)室前期研究基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)采用體內(nèi)外炎癥模型，系統(tǒng)研究了蜂膠對炎癥性疾?。?xì)菌脂多糖誘導(dǎo)小鼠肺損傷模型、硫酸葡聚糖誘導(dǎo)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型）和炎癥微環(huán)境（腸道微環(huán)境、免疫微環(huán)境）的影響，主要研究結(jié)果如下:
　　1.中國楊樹型蜂膠及其植物來源楊樹芽提取物對細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的影響
　　中國楊樹型蜂膠及楊樹芽提取物的主

3、要植物化學(xué)成分存在相似性，定性定量結(jié)果表明中國楊樹型蜂膠提取物的酚酸類化合物含量、種類較楊樹芽提取物更為豐富，體外自由基清除能力也更強(qiáng)。通過細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)建立小鼠急性肺損傷模型，發(fā)現(xiàn)高劑量中國蜂膠提取物和楊樹芽提取物灌胃小鼠（100 mg/kg）均可抑制血清中炎癥因子（白介素-6，單核細(xì)胞趨化蛋白-1，腫瘤壞死因子-α和白介素-12p70）的產(chǎn)生并能顯著緩解肺部炎性損傷癥狀;
　　2.蜂膠對硫酸葡聚糖誘導(dǎo)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的影響

4、r>　　通過建立3％硫酸葡聚糖飲水誘導(dǎo)建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，發(fā)現(xiàn)日糧中添加不同水平中國蜂膠（0.1％，0.2％和0.3％）對潰瘍性結(jié)腸炎的作用不盡相同，其中日糧中添加0.3％蜂膠對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的保護(hù)作用最為明顯，能顯著降低大鼠疾病活動指數(shù)，并能有效緩解結(jié)腸炎性病理改變。
　　3.中國蜂膠對腸上皮Caco-2細(xì)胞屏障功能影響及其機(jī)制
　　中國蜂膠能顯著提高Caco-2細(xì)胞單層跨膜電阻阻值，并能降低熒光黃滲透率。熒光定量

5、PCR結(jié)果表明蜂膠處理能提高緊密連接蛋白ZO-1和occludin的基因表達(dá)豐度，westernblot結(jié)果表明蜂膠能使腸道上皮Caco-2細(xì)胞AMPK-α、AKT.ERK1/2和p38蛋白發(fā)生磷酸化，采用特異性的蛋白抑制劑處理發(fā)現(xiàn)中國蜂膠對腸道屏障功能的調(diào)節(jié)作用受AMPK和ERK1/2信號通路所調(diào)節(jié)，而p38的激活則抑制了蜂膠對腸道屏障功能的促進(jìn)作用。
　　4.中國蜂膠和巴西蜂膠對巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制
　　利用巨噬

6、細(xì)胞體外炎癥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，探索了不同地理來源蜂膠對巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和對炎癥微環(huán)境相關(guān)信號通路的調(diào)控作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，中國蜂膠和巴西蜂膠盡管化學(xué)成分存在顯著差異，但均能顯著抑制細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)與釋放，同時也能緩解細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的累積。在調(diào)節(jié)細(xì)胞炎癥信號通路方面，報(bào)告基因結(jié)果表明蜂膠能顯著抑制炎癥過程中核心轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活，但兩種蜂膠調(diào)節(jié)機(jī)制并不完全相同。巴西蜂膠能同時抑制脂多糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞內(nèi)IκB-α蛋

7、白的磷酸化和降解，中國蜂膠能抑制IκB-α蛋白的磷酸化，但對該蛋白炎癥過程中發(fā)生的降解并沒有顯著的抑制作用。通過構(gòu)建HeLa-T6RZC穩(wěn)定細(xì)胞系進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，蜂膠是通過抑制TRAF6依賴的泛素鏈的形成進(jìn)而影響了TRAF6的泛素連接酶活性，從而抑制了NF-κB的激活。
　　綜上所述，本論文利用炎性疾病動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃脱装Y微環(huán)境細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ拖到y(tǒng)研究了蜂膠的抗炎作用及其機(jī)制，為蜂膠在炎癥性疾病及輔助治療癌癥、心血管疾病、糖尿病等復(fù)雜疾