植物基因安全轉(zhuǎn)化體系關(guān)鍵技術(shù)的研究.pdf

1、轉(zhuǎn)基因植物安全性問題一直是各界關(guān)注的問題，本研究利用分子生物學(xué)技術(shù)優(yōu)化改造傳統(tǒng)的植物表達(dá)載體，以獲得無選擇標(biāo)記基因、無目的基因和無目的蛋白的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品，從而減輕轉(zhuǎn)基因植物帶來的安全性問題?！　±肞CR方法擴(kuò)增玉米乙酰苯胺類化合物誘導(dǎo)啟動子(In5-2啟動子)，并與GUS基因相連構(gòu)建植物表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化煙草獲得轉(zhuǎn)基因煙草植株。在不同誘導(dǎo)時(shí)間和不同佐劑濃度條件下，對轉(zhuǎn)基因煙草的GUS活性進(jìn)行分析。結(jié)果表明，誘導(dǎo)劑的存在與GUS基因的表達(dá)呈

2、正相關(guān)，且隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長和佐劑濃度的增加，GUS活性均呈增長的趨勢。利用PCR技術(shù)獲得6個(gè)不同長度的玉米In5-2啟動子5’端缺失片段，分別克隆到植物表達(dá)載體p1301中構(gòu)建一系列植物表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化煙草獲得轉(zhuǎn)基因植株。GUS活性定量檢測結(jié)果顯示，玉米In5-2啟動子的核心功能區(qū)可能位于ATG上游-1520至-1431bp之間。利用DNAMAN軟件分析，在-1108至-1079bp和-891至-864bp之間存在著兩個(gè)莖環(huán)結(jié)構(gòu)，推測莖

3、環(huán)結(jié)合蛋白位點(diǎn)可能位于-1079至-897bp之間，且ATG上游-388至-86bp之間可能存在乙酰苯胺類化合物誘導(dǎo)元件?！　?gòu)建誘導(dǎo)型Cre/lox基因刪除系統(tǒng)，并在轉(zhuǎn)基因煙草中進(jìn)行驗(yàn)證?！　≡O(shè)計(jì)了一個(gè)“3-free”系統(tǒng)，用于生產(chǎn)無選擇標(biāo)記基因、無目的基因及其蛋白的轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品?！　±肞CR方法克隆了蘇云金芽孢桿菌毒蛋白水解酶基因(nprA)，并根據(jù)植物密碼子偏好性對其進(jìn)行改造，進(jìn)行全基因人工合成，命名為mnprA基因。分