Bt基因重組工程菌毒蛋白的表達及其對昆蟲的毒性研究.pdf

1、近年來,有關(guān)Bt毒蛋白基因遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的研究已取得顯著進展,特別是用該基因構(gòu)建工程菌成為研究的熱點.該文分三個部分對Bt毒蛋白基因重組工程菌作了相關(guān)研究.第一部分研究了7個Bt毒蛋白基因在大腸桿菌中的表達情況.工程菌用LB培養(yǎng)基,在37℃下150~200rpm搖動培養(yǎng)24h.收集菌體,經(jīng)反復(fù)凍融、超聲波破碎、離心,最后進行SDS-PAEG電泳.第二部分對工程菌ECE52表達蛋白的殺蟲活性進行了研究.工程菌ECE52和對照菌的發(fā)酵液

2、處理桑葉后飼喂4齡家蠶幼蟲,發(fā)現(xiàn)工程菌ECE52的表達蛋白有毒殺活性.一次性飼喂時當(dāng)濃度分別為0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml時,家蠶幼蟲在72h、48h、24h內(nèi)全部死亡.飼喂后24h、48h、72h的LC50值分別為0.101 mg/ml、0.045mg/ml、0.028mg/ml,LC95值分別為0.325 mg/ml、0.173 mg/ml、0.070 mg/ml.方差分析發(fā)現(xiàn),表達蛋白的濃度和取食時間

3、對家蠶幼蟲的死亡率有極顯著影響,而兩者的交互作用對死亡率也有極顯著影響.連續(xù)飼喂時,即使是低濃度經(jīng)過長時間的飼喂也可引起較高的死亡率.沒有死亡的幼蟲,其體重大大減輕,不能正?；?由此可以得出,工程菌ECE52中cry1Aa基因表達蛋白對4齡家蠶幼蟲有很強的毒性,死亡率取決于表達蛋白濃度和取食時間,而且低濃度的表達蛋白對家蠶的生長發(fā)育有抑制作用.第三部分研究了幾個理化因素——幾丁質(zhì)酶、化學(xué)添加劑、超聲波以及紫外線照射對工程菌ECE52表

4、達蛋白毒性的影響.結(jié)果顯示添加幾丁質(zhì)酶、ZnSO4、EDTA、甲酸均可提高工程菌ECE52表達蛋白對3齡家蠶幼蟲的毒效,且隨著添加物濃度(或活力)的升高,增效作用就越顯著.單獨用添加物處理過的桑葉飼喂家蠶幼蟲發(fā)現(xiàn)添加物本身對家蠶幼蟲幾乎無毒性,高濃度的ZnSO4、EDTA對家蠶幼蟲的致死率都為0,高濃度的幾丁質(zhì)酶、甲酸對家蠶幼蟲的致死率只有3.3﹪.方差分析發(fā)現(xiàn)添加物的濃度和取食時間對死亡率有極顯著的影響,而且添加物濃度和時間的交互作用