表達(dá)Mn14-sod基因酵母工程菌的構(gòu)建及其表達(dá)條件的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、超氧化物歧化酶(SOD)是一種金屬酶。根據(jù)其活性位點(diǎn)結(jié)合的金屬離子不同，SOD可分為CuZn-SOD、Fe-SOD和Mn-SOD以及最近發(fā)現(xiàn)的Ni-SOD和FeZn-SOD。由于SOD可以使超氧陰離子自由基歧化生成過(guò)氧化氫和分子氧，從而在防止氧化脅迫方面發(fā)揮重要作用。 蠟質(zhì)芽孢桿菌M22菌株(M22)是本實(shí)驗(yàn)室從植物體內(nèi)分離的對(duì)多種植物病害有良好防治效果的生防細(xì)菌。前期研究發(fā)現(xiàn)其代謝液及胞內(nèi)SOD含量較高，推測(cè)SOD可能在M22

2、定殖過(guò)程中以及在病害防治中發(fā)揮重要作用。 根據(jù)已克隆的M22菌株Mn14-SOD的基因序列，設(shè)計(jì)特異引物，擴(kuò)增Mn14-sod基因的編碼框序列。將擴(kuò)增產(chǎn)物插入到酵母分泌表達(dá)載體pPICZαA中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pPICZαA-sodMn14，然后電激轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。經(jīng)ZeocinTM抗性篩選、PCR鑒定得到含Mn14-sod基因的陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子；當(dāng)用PAGE電泳檢測(cè)它們的表達(dá)產(chǎn)物時(shí)，其中只有3株重組菌株P(guān)MSA、PMSB和PMSC的發(fā)酵上

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