慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠下丘腦突觸相關(guān)蛋白表達(dá)改變及五乙酰梔子苷的抗抑郁作用研究.pdf

1、隨著生活節(jié)奏的加快，在面對(duì)不同類型的壓力下，越來(lái)越多的人受到抑郁癥的困擾。抑郁癥發(fā)生機(jī)制的假說(shuō)目前主要有單胺遞質(zhì)假說(shuō)、受體假說(shuō)、神經(jīng)內(nèi)分泌假說(shuō)和神經(jīng)可塑性假說(shuō)等，這些假說(shuō)涉及一個(gè)共同的通路——下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸。在眾多假說(shuō)中神經(jīng)可塑性假說(shuō)的出現(xiàn)解釋了其他一些假說(shuō)中存在的爭(zhēng)議。近年來(lái)隨著影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的證據(jù)表明抑郁癥與神經(jīng)可塑性變化密切相關(guān)，阻止神經(jīng)可塑性變化也成為目前抗抑郁治療最主要的方向之一。抗抑郁藥物，特別

2、是第三、四代抗抑郁藥，有著更高的緩解治療率和更佳的耐受性，但治愈率仍在30%左右。更多的抗抑郁藥物研究者將眼光投向中藥。目前已有大量研究表明一些中藥通過(guò)影響HPA軸達(dá)到較好的抗抑郁作用，部分與西藥聯(lián)用具有增效作用。這為抗抑郁藥物的研究提供了一個(gè)全新的方向。
　　本課題的主要研究?jī)?nèi)容包括以下兩個(gè)方面：
　　第一部分慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠下丘腦突觸相關(guān)蛋白表達(dá)改變及其病理意義
　　目的：觀察慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠下丘腦谷氨酸A

3、MPA受體和突觸相關(guān)蛋白表達(dá)改變及病理意義。方法：連續(xù)3周慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和應(yīng)激(CUMS)制備大鼠抑郁模型，測(cè)量動(dòng)物行為學(xué)改變(糖水偏愛(ài)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn))，Elisa檢測(cè)血清皮質(zhì)酮(CORT)水平，免疫組化法檢測(cè)下丘腦室旁核(PVN)CRH及GluR1蛋白表達(dá)，免疫熒光雙標(biāo)觀察CRH與GluR1在PVN CRH神經(jīng)元的共表達(dá)情況，QPCR和WB檢測(cè)下丘腦組織中GluR1和突觸相關(guān)蛋白(PSD95，SYP和MAP2)mRNA及蛋白表達(dá)。結(jié)果：

4、與正常組比較，CUMS大鼠存在明顯行為學(xué)異常(糖水消耗量下降、穿格數(shù)和直立數(shù)減少)和血清CORT升高，表明CUMS抑郁模型制備成功；免疫組化結(jié)果表明CUMS大鼠PVN CRH及GluR1蛋白表達(dá)升高，免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果表明CRH與GluR1在PVN神經(jīng)元存在共表達(dá)現(xiàn)象，提示GluR1定位于CRH神經(jīng)元細(xì)胞膜上；CUMS大鼠下丘腦組織中 GluR1和突觸相關(guān)蛋白(PSD95，SYP和 MAP2)的mRNA及蛋白表達(dá)均明顯上調(diào)，下丘腦GluR

5、1、PSD95、SYP和MAP2的蛋白水平與大鼠糖水偏愛(ài)率和總穿格數(shù)存在負(fù)相關(guān)。結(jié)論：CUMS大鼠下丘腦中谷氨酸能系統(tǒng)和突觸系統(tǒng)明顯失調(diào)，導(dǎo)致下丘腦室旁核中CRH神經(jīng)元過(guò)度激活，并與大鼠抑郁樣行為密切相關(guān)。
　　第二部分五乙酰梔子苷對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠抑郁樣行為的影響及機(jī)制研究目的：觀察五乙酰梔子苷對(duì)對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠抑郁樣行為的影響及機(jī)制研究。方法：60只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、五乙酰梔子苷(25,50,100 mg/

6、kg)和氟西汀組(10 mg/kg)。除正常組外，均采用慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激(CUMS)制備大鼠抑郁模型。從造模第8天開(kāi)始，五乙酰梔子苷和氟西汀連續(xù)灌胃給藥2周。糖水偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)及強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠行為學(xué)，檢測(cè)血清皮質(zhì)酮(CORT)、腎上腺指數(shù)及下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)mRNA，WB檢測(cè)下丘腦
　　GluR1, PSD95, SYP及 MAP2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：與正常組相比，CUMS大鼠表現(xiàn)出異常行為學(xué)

7、及HPA軸活化。五乙酰梔子苷能逆轉(zhuǎn)CUMS誘導(dǎo)的大鼠行為學(xué)改變，包括提高糖水消耗量、增加穿格數(shù)和站立數(shù)、縮短不動(dòng)時(shí)間及延長(zhǎng)游泳時(shí)間；五乙酰梔子苷能使CUMS大鼠異常的HPA軸功能恢復(fù)，包括降低血清CORT和腎上腺指數(shù)、抑制下丘腦CRH mRNA表達(dá)。有意思的是，五乙酰梔子苷能不同程度地降低CUMS大鼠下丘腦GluR1，PSD95，SYP及 MAP2蛋白水平。結(jié)論：五乙酰梔子苷可以改善CUMS大鼠行為學(xué)，其抗抑郁作用可能與調(diào)節(jié)HPA軸功能