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1、目的:探討硫化氫(Hydrogen sulfide,H2S)是否可以通過上調(diào)SIRT1拮抗同型半胱氨酸誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老。
方法:Cell counting Kit-8(CCK8)法檢測(cè)細(xì)胞的活性;β-半乳糖苷酶染色法(Senescence Associated acidic-β-Galactosidase SA-β-Gal)、臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)求細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及Western Blotting檢測(cè)細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白P16INK4a、P
2、21CIPL蛋白的表達(dá)評(píng)價(jià)HT22細(xì)胞衰老;Western Blotting檢測(cè)沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Silent mating type information regulation homolog1,SIRT1)蛋白的表達(dá);羅丹明123(Rh123)染色熒光顯微鏡照相檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位;Annexin V/PI染色流式細(xì)胞儀和Hoechst33258染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
結(jié)果:1.Hcy(2.5、5、10 mmol/L)處理
3、HT22細(xì)胞48h后,SA-β-Gal陽性細(xì)胞明顯增加,衰老負(fù)性調(diào)控蛋白 P16INK4a、P21CIPL蛋白表達(dá)明顯上調(diào),細(xì)胞生長(zhǎng)曲線明顯呈下降趨勢(shì),表明 Hcy能誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老。2. NaHS(H2S供體,100、200、400μmol/L)可呈濃度依賴性地抑制Hcy(5mmol/L,48 h)誘導(dǎo)HT22細(xì)胞SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞增加,P16INK4a、P21CIPL蛋白表達(dá)上調(diào)及細(xì)胞生長(zhǎng)曲線下降趨勢(shì),表明H2S可拮抗
4、Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老。3. Hcy(2.5、5、10 mmol/L)處理 HT22細(xì)胞48小時(shí)后,細(xì)胞 SIRT1蛋白的表達(dá)呈濃度依賴性下調(diào),表明 Hcy可抑制HT22細(xì)胞 SIRT1蛋白的表達(dá)。4. NaHS (100、200、400μmol/L,48h)可濃度依賴性地上調(diào) HT22細(xì)胞 SIRT1蛋白的表達(dá),而且可逆轉(zhuǎn)Hcy(5 mmol/L)處理HT22細(xì)胞后SIRT1蛋白表達(dá)的下調(diào)作用,表明 H2S可上調(diào) HT2
5、2細(xì)胞 SIRT1的表達(dá)。5. SIRT1抑制劑Sirtinol(15μmol/L)可逆轉(zhuǎn)NaHS(400μmol/L)對(duì)Hcy(5mmol/L,48 h)增加HT22細(xì)胞中SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞比例、上調(diào)衰老相關(guān)關(guān)鍵蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白表達(dá)以及促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線下降趨勢(shì)的阻斷作用,表明SIRT1對(duì)H2S抑制Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老具有介導(dǎo)作用。
結(jié)論:H2S通過上調(diào)SIRT1拮抗Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)
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