硫化氫上調Sirt1的表達抑制肝癌HepG-2細胞的遷移.pdf

1、【目的】
　　研究硫化氫（H2S）對肝癌HepG-2細胞遷移的影響及其Sirt1依賴機制，為肝癌的防治提供新靶點。
　　【方法】
　　1.體外培養(yǎng)肝癌HepG-2細胞，設空白組、100、200和400μmol/L的H2S供體硫氫化鈉（NaHS）共4組，作用肝癌HepG-2細胞16 h后，通過劃痕愈合實驗檢測 H2S對肝癌 HepG-2細胞愈合能力的影響；作用24 h后，通過Transwell實驗檢測H2S對肝癌HepG

2、-2細胞遷移的影響，并用Western blot檢測H2S對肝癌HepG-2細胞細胞內Sirt1及MMP-9表達的影響。
　　2.取NaHS抑制肝癌HepG-2細胞遷移效果較好的濃度組進行下一步實驗，設空白對照組及NaHS（400μmol/L）、Sirtinol（Sirt1抑制劑，20μmol/L）+NaHS（400μmol/L）和Sirtinol（20μmol/L）共4組，先用Sirtinol預處理肝癌HepG-2細胞30min

3、抑制肝癌HepG-2細胞內Sirt1表達后，再給予NaHS共同作用肝癌HepG-2細胞16 h后，通過劃痕愈合實驗檢測H2S對肝癌HepG-2細胞愈合能力的影響；并通過Transwell實驗檢測H2S對肝癌HepG-2細胞遷移的影響，并用Western blot檢測MMP-9的表達情況。
　　【結果】
　　1.1、劃痕實驗結果顯示，H2S供體NaHS（100、200、400μmol/L）組的遷移距離分別為（156.8±14.

4、32）、（139.4±20.21）、（124.8±14.15）μm，較空白對照組（174.2±18.99）μm細胞遷移距離明顯下降(P＜0.05)。Transwell試驗結果顯示， 3個不同NaHS濃度（100、200、400μmol/L）組穿過微孔濾膜的HepG-2細胞數(shù)分別為(18.3±1.16)、(16.3±1.52)、(12.3±0.58)個，較空白對照組(24.0±1.73)個的穿膜細胞數(shù)顯著下降(P＜0.05)。<

5、br>　　1.2、 Western blot結果顯示，NaHS（100、200、400μmol/L）組Sirt1蛋白表達水平高于空白對照組（P＜0.05）；MMP-9蛋白表達水平與空白對照組相比明顯下降(P＜0.05)。
　　2.1、抑制 Sirt1的表達后，劃痕實驗結果顯示， NaHS組細胞遷移距離（132.40±15.50）μm低于對照組（187.60±34.41）μm（P＜0.01）；NaHS+Sirtinol組細胞遷移距離

6、（223.6.0±31.67）μm高于NaHS組（132.40±15.50）μm（P＜0.001）；對照組細胞遷移距離（187.60±34.41）μm低于 Sirtinol組（268.20±35.00）μm(P＜0.01)。Transwell實驗結果顯示，NaHS組穿過濾膜的細胞數(shù)(13.3±0.58)個低于對照組(30±1.73)個（P＜0.01）；NaHS+Sirtinol組穿過濾膜的細胞數(shù)(48.7±8.96)個高于NaHS組(1

7、3.3±0.58)個（P＜0.01）；對照組穿過濾膜的細胞數(shù)(30±1.73)個低于Sirtinol組(105±9.00)個（P＜0.05）。
　　2.2、抑制Sirt1表達后，Western blot結果顯示，NaHS組MMP-9蛋白表達水平低于對照組（P＜0.01）；NaHS+Sirtinol組MMP-9蛋白表達水平高于NaHS組（P＜0.01）；對照組MMP-9蛋白表達水平低于Sirtinol組（P＜0.05）。