硫化氫上調(diào)Sirt1的表達(dá)抑制肝癌HepG-2細(xì)胞的遷移.pdf

1、【目的】
　　研究硫化氫（H2S）對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞遷移的影響及其Sirt1依賴(lài)機(jī)制，為肝癌的防治提供新靶點(diǎn)。
　　【方法】
　　1.體外培養(yǎng)肝癌HepG-2細(xì)胞，設(shè)空白組、100、200和400μmol/L的H2S供體硫氫化鈉（NaHS）共4組，作用肝癌HepG-2細(xì)胞16 h后，通過(guò)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè) H2S對(duì)肝癌 HepG-2細(xì)胞愈合能力的影響；作用24 h后，通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H2S對(duì)肝癌HepG

2、-2細(xì)胞遷移的影響，并用Western blot檢測(cè)H2S對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)Sirt1及MMP-9表達(dá)的影響。
　　2.取NaHS抑制肝癌HepG-2細(xì)胞遷移效果較好的濃度組進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，設(shè)空白對(duì)照組及NaHS（400μmol/L）、Sirtinol（Sirt1抑制劑，20μmol/L）+NaHS（400μmol/L）和Sirtinol（20μmol/L）共4組，先用Sirtinol預(yù)處理肝癌HepG-2細(xì)胞30min

3、抑制肝癌HepG-2細(xì)胞內(nèi)Sirt1表達(dá)后，再給予NaHS共同作用肝癌HepG-2細(xì)胞16 h后，通過(guò)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H2S對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞愈合能力的影響；并通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H2S對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞遷移的影響，并用Western blot檢測(cè)MMP-9的表達(dá)情況。
　　【結(jié)果】
　　1.1、劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，H2S供體NaHS（100、200、400μmol/L）組的遷移距離分別為（156.8±14.

4、32）、（139.4±20.21）、（124.8±14.15）μm，較空白對(duì)照組（174.2±18.99）μm細(xì)胞遷移距離明顯下降(P＜0.05)。Transwell試驗(yàn)結(jié)果顯示， 3個(gè)不同NaHS濃度（100、200、400μmol/L）組穿過(guò)微孔濾膜的HepG-2細(xì)胞數(shù)分別為(18.3±1.16)、(16.3±1.52)、(12.3±0.58)個(gè)，較空白對(duì)照組(24.0±1.73)個(gè)的穿膜細(xì)胞數(shù)顯著下降(P＜0.05)。<

5、br>　　1.2、 Western blot結(jié)果顯示，NaHS（100、200、400μmol/L）組Sirt1蛋白表達(dá)水平高于空白對(duì)照組（P＜0.05）；MMP-9蛋白表達(dá)水平與空白對(duì)照組相比明顯下降(P＜0.05)。
　　2.1、抑制 Sirt1的表達(dá)后，劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示， NaHS組細(xì)胞遷移距離（132.40±15.50）μm低于對(duì)照組（187.60±34.41）μm（P＜0.01）；NaHS+Sirtinol組細(xì)胞遷移距離

6、（223.6.0±31.67）μm高于NaHS組（132.40±15.50）μm（P＜0.001）；對(duì)照組細(xì)胞遷移距離（187.60±34.41）μm低于 Sirtinol組（268.20±35.00）μm(P＜0.01)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NaHS組穿過(guò)濾膜的細(xì)胞數(shù)(13.3±0.58)個(gè)低于對(duì)照組(30±1.73)個(gè)（P＜0.01）；NaHS+Sirtinol組穿過(guò)濾膜的細(xì)胞數(shù)(48.7±8.96)個(gè)高于NaHS組(1

7、3.3±0.58)個(gè)（P＜0.01）；對(duì)照組穿過(guò)濾膜的細(xì)胞數(shù)(30±1.73)個(gè)低于Sirtinol組(105±9.00)個(gè)（P＜0.05）。
　　2.2、抑制Sirt1表達(dá)后，Western blot結(jié)果顯示，NaHS組MMP-9蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組（P＜0.01）；NaHS+Sirtinol組MMP-9蛋白表達(dá)水平高于NaHS組（P＜0.01）；對(duì)照組MMP-9蛋白表達(dá)水平低于Sirtinol組（P＜0.05）。