硫化氫通過上調(diào)瘦素信號通路拮抗檳榔堿誘導的PC12細胞毒性.pdf

1、[研究背景與目的]最近研究發(fā)現(xiàn)檳榔中的主要生物堿檳榔堿(Arecoline)具有神經(jīng)毒性作用，其神經(jīng)毒性與其誘導細胞凋亡和氧化應激有關。硫化氫(Hydrogen sulfide,H2S)不僅僅是一種新型的中樞系統(tǒng)神經(jīng)調(diào)質(zhì)，而且是一種具有抗凋亡和抗氧化應激作用的神經(jīng)保護劑。瘦素(leptin)是由脂肪細胞分泌的一種激素，通過作用于在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system，CNS)廣泛分布的長型瘦素受體(leptin r

2、eceptor,lepRb)發(fā)揮多種生物學功能。越來越多的研究證實leptin信號通路具有神經(jīng)保護作用。因此，在本研究中，我們擬探討H2S是否可拮抗Arecoline誘導的神經(jīng)細胞毒性以及l(fā)eptin信號通路是否介導 H2S拮抗 Arecoline誘導的神經(jīng)細胞毒性。
　　[方法]Cell Counting Kit-8(CCK-8)法檢測PC12細胞活力；Hoechst33258染色檢測凋亡細胞形態(tài)；Annexin V/PI(pr

3、opidium iodide)染色流式細胞術檢測PC12細胞凋亡率；Elisa法檢測PC12細胞內(nèi)Caspase-3活力和細胞培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin水平；Unisensn H2S微電極檢測PC12細胞培養(yǎng)上清液中H2S水平；Western Blot檢測PC12細胞內(nèi)H2S生成酶：胱硫醚-β-合成酶(Cystathionine-bata-synthase，CBS)和3-巰基丙酮酸鹽硫(3-mercaptopyruvate sulphur

4、transferase,3-MST)蛋白的表達、leptin和LepRb蛋白的表達、凋亡相關蛋白(Bax和Bcl-2)、以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關蛋白Glucose-regulated protein78(GRP78)、CCAAT/enhancer binding protein(C/EBP) homologous protein(CHOP)和Cleaved caspase-12 proteins的表達。
　　[結果]Arecoline(

5、0.5、1和2 mM)處理PC12細胞24 h能明顯降低PC12細胞活力、誘導PC12細胞發(fā)生凋亡形態(tài)改變以及增加細胞凋亡率、上調(diào)細胞內(nèi)Caspase-3的活性以及促凋亡蛋白Bax的表達、降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，增加 PC12細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關蛋白(GRP78、CHOP和Cleaved caspase-12)的表達，降低細胞內(nèi) H2S合酶(CBS和3-MST)蛋白表達以及培養(yǎng)上清液中H2S水平。而預處理NaHS(H2S供體，40