硫化氫通過上調(diào)瘦素信號(hào)通路拮抗檳榔堿誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞毒性.pdf

1、[研究背景與目的]最近研究發(fā)現(xiàn)檳榔中的主要生物堿檳榔堿(Arecoline)具有神經(jīng)毒性作用，其神經(jīng)毒性與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激有關(guān)。硫化氫(Hydrogen sulfide,H2S)不僅僅是一種新型的中樞系統(tǒng)神經(jīng)調(diào)質(zhì)，而且是一種具有抗凋亡和抗氧化應(yīng)激作用的神經(jīng)保護(hù)劑。瘦素(leptin)是由脂肪細(xì)胞分泌的一種激素，通過作用于在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system，CNS)廣泛分布的長(zhǎng)型瘦素受體(leptin r

2、eceptor,lepRb)發(fā)揮多種生物學(xué)功能。越來越多的研究證實(shí)leptin信號(hào)通路具有神經(jīng)保護(hù)作用。因此，在本研究中，我們擬探討H2S是否可拮抗Arecoline誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性以及l(fā)eptin信號(hào)通路是否介導(dǎo) H2S拮抗 Arecoline誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性。
　　[方法]Cell Counting Kit-8(CCK-8)法檢測(cè)PC12細(xì)胞活力；Hoechst33258染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞形態(tài)；Annexin V/PI(pr

3、opidium iodide)染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PC12細(xì)胞凋亡率；Elisa法檢測(cè)PC12細(xì)胞內(nèi)Caspase-3活力和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中l(wèi)eptin水平；Unisensn H2S微電極檢測(cè)PC12細(xì)胞培養(yǎng)上清液中H2S水平；Western Blot檢測(cè)PC12細(xì)胞內(nèi)H2S生成酶：胱硫醚-β-合成酶(Cystathionine-bata-synthase，CBS)和3-巰基丙酮酸鹽硫(3-mercaptopyruvate sulphur

4、transferase,3-MST)蛋白的表達(dá)、leptin和LepRb蛋白的表達(dá)、凋亡相關(guān)蛋白(Bax和Bcl-2)、以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白Glucose-regulated protein78(GRP78)、CCAAT/enhancer binding protein(C/EBP) homologous protein(CHOP)和Cleaved caspase-12 proteins的表達(dá)。
　　[結(jié)果]Arecoline(

5、0.5、1和2 mM)處理PC12細(xì)胞24 h能明顯降低PC12細(xì)胞活力、誘導(dǎo)PC12細(xì)胞發(fā)生凋亡形態(tài)改變以及增加細(xì)胞凋亡率、上調(diào)細(xì)胞內(nèi)Caspase-3的活性以及促凋亡蛋白Bax的表達(dá)、降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，增加 PC12細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白(GRP78、CHOP和Cleaved caspase-12)的表達(dá)，降低細(xì)胞內(nèi) H2S合酶(CBS和3-MST)蛋白表達(dá)以及培養(yǎng)上清液中H2S水平。而預(yù)處理NaHS(H2S供體，40