電針對帕金森病大鼠抗腦組織氧化損傷及神經(jīng)保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：帕金森病(PD)是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性退行性疾病，嚴重威脅著中老年人的身體健康和生活質(zhì)量。本研究采用頸、背部皮下注射魚藤酮溶液制備PD大鼠模型，擬用補腎養(yǎng)肝填髓、熄風通絡止顫法，觀察電針百會、三陰交、太沖穴對實驗性PD大鼠行為學、中腦黑質(zhì)超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量的影響，探討其抗腦組織氧化損傷的作用機制；觀察其對中腦黑質(zhì)酪氨酸羥化酶(TH)及多巴胺(D

2、A)能神經(jīng)細胞凋亡的影響，探討其對PD大鼠DA能神經(jīng)元的保護作用，進一步研究針灸治療PD的作用機制。
　　方法：
　　78只Wistar大鼠均自然光照，自由飲水進食，正常飼養(yǎng)1周后，隨機選取58只作為模型組大鼠，采用頸、背部皮下注射魚藤酮溶液0.8mg/kg·d，(溶劑為二甲基亞砜，濃度為2mg/ml)28d制備PD大鼠模型；其余20只作為正常組注射等體積的溶劑。造模結束后，通過網(wǎng)格實驗、懸掛實驗和開闊實驗對比模型組和正常組

3、大鼠的行為學變化，模型組和正常組各隨機選取10只剖殺，觀察組織形態(tài)和神經(jīng)生化變化，以判定造模成功與否。造模成功后將模型組大鼠隨機分為模型組、西藥組和電針組。
　　動物模型建立后次日開始治療，西藥組大鼠每日給予美多巴混懸液灌胃1.67mg/kg·d(生理鹽水配制的濃度為25mg/ml的美多巴混懸液)；電針組大鼠每日按順序給予治療，將大鼠固定在自制束鼠器上，參照全國針灸學會實驗針灸研究會制定的《實驗動物針灸穴位圖譜》，選百會、三陰交、

4、太沖穴，用ψ0.30mm×13mm毫針刺入，接韓氏電針儀，采用疏密波，頻率疏波2Hz、密波80Hz，強度2.0mA，10min/次·d，西藥組和電針組均7d/療程，共治療2個療程，療程間休息1d；除西藥組外，其余各組均灌服等體積的生理鹽水；除電針組外，其余各組均采用同一體位固定10min/次·d。治療均由同一操作者操作。
　　治療結束后，觀察大鼠包括懸掛實驗、網(wǎng)格實驗及開闊實驗在內(nèi)的行為學變化后，將大鼠脫臼處死取腦，右腦取中腦黑質(zhì)

5、行黃嘌呤氧化酶法測定腦組織SOD活力，比色定量分析法測定GSH、GSH-Px含量，硫代巴比妥酸比色分析法測定MDA含量。左腦行中腦黑質(zhì)TH免疫組化(S-P法)染色檢查和TUNEL法檢測DA能神經(jīng)細胞凋亡。連接顯微圖像分析系統(tǒng)測量平均光密度值(AOD)。
　　結果：
　　1造模第28天模型組和正常組觀察指標比較
　　1.1模型組和正常組大鼠行為學比較
　　懸掛實驗：模型組評分值明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<

6、0.01)；網(wǎng)格實驗：模型組大鼠移動潛期長于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；開闊實驗：模型組大鼠靜止性蹲坐時間長于正常組(P<0.05)，而站立時間短于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　1.2模型組和正常組大鼠中腦黑質(zhì)SOD活力、GSH、GSH-Px、MDA含量比較
　　正常組大鼠SOD活力高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；GSH含量高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；GSH-P

7、x含量高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；MDA含量低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　1.3模型組和正常組大鼠中腦黑質(zhì)TH及DA能神經(jīng)細胞凋亡比較
　　正常組中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)元形態(tài)完整，細胞排列相對整齊；核呈圓形或錐形，大而清晰，核仁明顯；神經(jīng)纖維排列整齊，結構緊密。模型組神經(jīng)元部分輕度腫脹，體積增大，細胞間隙增寬；細胞核形態(tài)不一，體積增大，偏居一側，核仁不明顯；神經(jīng)纖維排列紊亂，結構疏松。

8、r>　　正常組中腦黑質(zhì)TH免疫反應陽性神經(jīng)元呈棕褐色，密集分布，數(shù)量較多，胞體較大，神經(jīng)元突起明顯。模型組中腦黑質(zhì)TH免疫反應陽性神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，神經(jīng)元胞體輪廓及突起不清晰。統(tǒng)計學處理AOD值顯示，模型組大鼠黑質(zhì)TH陽性細胞數(shù)與正常組相比明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　與正常組相比，模型組出現(xiàn)大量凋亡細胞，統(tǒng)計學處理AOD值顯示，模型組大鼠黑質(zhì)凋亡細胞數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　

9、2治療前后正常組、模型組、西藥組和電針組觀察指標比較
　　2.1治療前后各組大鼠行為學比較
　　懸掛實驗：治療前模型組、西藥組和電針組評分值均低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；模型組、西藥組和電針組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后模型組評分值低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組評分值高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；西藥組評分值與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.0

10、5)；電針組評分值與西藥組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　網(wǎng)格實驗：治療前模型組、西藥組和電針組大鼠移送潛伏期均高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；模型組、西藥組和電針組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后模型組大鼠移動潛伏期高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；西藥組與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；電針組與西藥組相比，

11、差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　開闊實驗：治療前模型組、西藥組和電針組大鼠靜止性蹲坐時間均高于正常組，站立時間均低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；模型組、西藥組和電針組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后電針組和西藥組靜止性蹲坐時間均低于模型組，站立時間均高于模型組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組靜止性蹲坐時間與西藥組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，站立時間低于西藥組，差異有統(tǒng)計

12、學意義(P<0.01)。
　　2.2治療后各組大鼠中腦黑質(zhì)SOD活力、GSH、GSH-Px、MDA含量比較
　　SOD活力比較：模型組低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，差異無顯著意義(P>0.05)；電針組高于西藥組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。GSH含量比較：模型組低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組高于模型組，差異有

13、統(tǒng)計學意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；電針組與西藥組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。GSH-Px含量比較：模型組低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；電針組高于西藥組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。MDA含量比較：模型組高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；電針

14、組低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；西藥組低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組與西藥組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2.3治療后大鼠中腦黑質(zhì)Th及DA能神經(jīng)細胞凋亡的變化
　　模型組與正常組相比DA能神經(jīng)元部分輕度腫脹，體積增大，細胞間隙增寬；細胞核形態(tài)不一，體積增大，偏居一側，核仁不明顯；神經(jīng)纖維排列紊亂，結構疏松。電針組與模型組相比DA能神經(jīng)元改善明顯，神經(jīng)元腫脹減少減輕，體積

15、變小，細胞間隙變窄；細胞形態(tài)較規(guī)則，體積較正常，核仁較明顯，神經(jīng)纖維排列較整齊，結夠較密集，西藥組改善差于電針組，優(yōu)于模型組。
　　模型組與正常組相比TH免疫反應陽性神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，神經(jīng)元胞體輪廓及突起不清晰。電針組與模型組相比TH改善明顯，陽性神經(jīng)元數(shù)目增多，神經(jīng)元胞體輪廓及突起較情。西藥組改善差于電針組，優(yōu)于模型組。電針組、西藥組均差于正常組。統(tǒng)計學處理AOD值顯示，模型組與正常組相比，TH陽性神經(jīng)元數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學意

16、義(P<0.01)；電針組與模型組相比，TH陽性神經(jīng)元數(shù)增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，TH陽性神經(jīng)元數(shù)增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組與西藥組相比，TH陽性神經(jīng)元數(shù)增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　模型組與正常組相比中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)細胞凋亡明顯，模型組出現(xiàn)大量凋亡細胞。電針組、西藥組與模型組相比凋亡細胞減少，且電針組凋亡細胞數(shù)少于西藥組。統(tǒng)計學處理AOD值顯示，模型組與正常

17、組相比，凋亡細胞數(shù)增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組與模型組相比，凋亡細胞數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，凋亡細胞數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；電針組與西藥組相比，凋亡細胞數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論：
　　1采用頸、背部皮下注射魚藤酮溶液制備PD大鼠模型，模型組動物出現(xiàn)行為學改變，抗氧化能力下降，中腦黑質(zhì)DA神經(jīng)元嚴重受損，數(shù)目減少，細胞凋亡明顯，提示