氧濃度梯度下多形核白細(xì)胞的趨化特性與機(jī)制.pdf

1、缺氧是多種炎癥性疾病的共同病理生理過(guò)程，亦是細(xì)胞損傷最常見(jiàn)的原因。發(fā)生炎癥的組織常處于代謝旺盛的狀態(tài)，需消耗大量的氧，因此炎癥微環(huán)境常處于缺氧狀態(tài)。另一方面，炎癥細(xì)胞在遷移運(yùn)動(dòng)、處理異物（例如通過(guò)呼吸爆發(fā)產(chǎn)生氧自由基）等活動(dòng)中需要大量ATP，需要大量的氧氣。因此，炎癥細(xì)胞從相對(duì)富氧的血液循環(huán)向相對(duì)缺氧的炎癥微環(huán)境浸潤(rùn)（逆氧而行）的過(guò)程中，這一氧供需矛盾更加突出。雖然炎癥細(xì)胞可以通過(guò)無(wú)氧酵解獲得能量，具備較強(qiáng)的耐缺氧能力，但是僅僅通過(guò)無(wú)氧

2、酵解獲得的能量有限，同時(shí)氧自由基的產(chǎn)生仍需要較多的氧供給。而且，炎癥細(xì)胞仍然存在較完整的低氧感知相關(guān)的信號(hào)傳遞系統(tǒng)。因此，氧濃度梯度對(duì)炎癥細(xì)胞的遷移行為可能具有十分重要的作用，弄清炎癥細(xì)胞在氧濃度梯度下的運(yùn)動(dòng)特點(diǎn)以及機(jī)制，對(duì)適時(shí)適度控制炎癥反應(yīng)以及炎性疾病的防治具有十分重要的意義。
　　目的：以大鼠外周血多形核白細(xì)胞(polymorphonuclear neutrophils，PMN)為研究對(duì)象，研究PMN在氧濃度梯度下的趨化特性

3、與機(jī)制。
　　方法：用ibidi6通道細(xì)胞趨化板，觀察PMN在氧濃度梯度下的趨化方向。用AP48孔趨化板觀察趨化因子或缺氧預(yù)處理后，PMN在缺氧條件下趨化能力的變化。用趨化實(shí)驗(yàn)觀察不同缺氧程度、不同缺氧時(shí)間后，PMN培養(yǎng)上清的趨化能力，結(jié)合甲酰肽受體拮抗劑，分析PMN缺氧上清中甲酰肽受體激動(dòng)劑水平。并用免疫印跡檢測(cè)PMN不同缺氧時(shí)間（0、3、6、12、24h）不同缺氧濃度（1％、5%、10%、21%）或趨化因子作用后胞紅蛋白（cy

4、toglobin, CYGB）的表達(dá)。
　　結(jié)果：在氧濃度梯度下，PMN趨化呈現(xiàn)明顯的方向性，PMN向氧濃度梯度的低氧側(cè)遷移。預(yù)缺氧增強(qiáng)PMN在缺氧條件下的趨化活性。細(xì)胞缺氧培養(yǎng)上清誘導(dǎo)的趨化反應(yīng)顯著高于常氧培養(yǎng)上清，用甲酰肽受體特異性拮抗劑可顯著削弱這一反應(yīng)。隨著氧濃度的降低，缺氧培養(yǎng)PMN的上清誘導(dǎo)的趨化反應(yīng)增高。用甲酰肽受體激動(dòng)劑預(yù)處理或缺氧預(yù)處理，顯著增強(qiáng)PMN在缺氧條件下對(duì)血清的趨化反應(yīng)，并劑量依賴性地上調(diào)白細(xì)胞CYGB