微接觸印刷法制備膠原蛋白濃度梯度及其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞粘附與遷移的研究.pdf

1、為將不同濃度蛋白經(jīng)單一步驟轉(zhuǎn)印至同一個(gè)基材表面，我們嘗試在傳統(tǒng)微接觸印刷技術(shù)上進(jìn)行改進(jìn)。本文采用利用微接觸印刷技術(shù)在同一模板上印刷四種濃度膠原(50、100、200、300μg/ml)，實(shí)現(xiàn)了在同一基材表面制備含有不同蛋白濃度的模板材料。掃描電子顯微鏡分析表明：PDMS印章表面平整，圖形完整。激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度FITC-膠原蛋白(50、100、200、300μg/ml)在基材表面吸附情況。采用熒光分析軟件分析了基材表面蛋白域熒

2、光強(qiáng)度與蛋白濃度的相關(guān)性。白蛋白用來封閉蛋白未粘附域，封閉后模板材料表面接種人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，探討不同濃度膠原蛋白構(gòu)建的生物材料對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞粘附與遷移的影響。以MTT法考察不用濃度膠原對(duì)人臍帶內(nèi)皮細(xì)胞在6、24、48、72 h內(nèi)的增殖能力影響。激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)初始粘附期細(xì)胞骨架鋪展?fàn)顩r；單個(gè)細(xì)胞軌跡測(cè)量法測(cè)量?jī)?nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)24 h后的遷移速率和凈位移。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：模板材料表面蛋白域完整，蛋白域內(nèi)熒光強(qiáng)度均勻，50、100、200、30

3、0μg/ml4種濃度FITC-膠原蛋白在基材表面吸附的熒光強(qiáng)度逐步增加，分別：38.51±1.63、55.21±3.88、73.17±3.59、80.59±1.12。不同濃度蛋白域內(nèi)皮細(xì)胞骨架鋪展比空白組鋪展充分。各濃度組內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力和凈位移均強(qiáng)于空白組(P＜0.05)，隨著濃度的增加(50μg/ml至300μg/ml)，內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力和凈位移增強(qiáng)(P＜0.05)。除300μg/m濃度組外各濃度組遷移速率均小于對(duì)照組(P＜0.05