黃芪多糖影響巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：前期研究發(fā)現(xiàn):黃芪多糖(Astragalus Polysaccharides，APS)能夠減少脂肪組織中的巨噬細(xì)胞（adipose tissue macrophages，ATMs），改善胰島素抵抗(insulin resistance，IR)和降低血糖水平。ATMs在脂肪組織的炎癥反應(yīng)中具有重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，隨著IR的出現(xiàn)，促炎表達(dá)型巨噬細(xì)胞會(huì)隨著ATMs數(shù)量增加而增加。巨噬細(xì)胞遷移到脂肪組織后，脂肪組織釋放IL-1β、IL-

2、6、TNF-α、MCP-1等細(xì)胞因子，又正向調(diào)節(jié)使巨噬細(xì)胞釋放更高水平的TNF-α、IL-6、IL-12。APS對(duì)脂肪細(xì)胞及巨噬細(xì)胞分泌炎性因子的影響，觀察巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化中的作用，又是通過何種機(jī)制減少ATMs，需要迸一步探討。
　　目的：通過黃芪多糖干預(yù)巨噬細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，進(jìn)一步揭示黃芪多糖阻止巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化的作用位點(diǎn)及機(jī)制，為其應(yīng)用于臨床調(diào)節(jié)免疫提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：1.誘導(dǎo)分化細(xì)胞:脂肪細(xì)胞采用前脂肪

3、細(xì)胞3T3-L1細(xì)胞株，巨噬細(xì)胞采用ANA-1細(xì)胞株。使3T3-L1前脂肪細(xì)胞接種于培養(yǎng)板，用含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)在37℃、5％CO2箱中培養(yǎng);待細(xì)胞長滿至80-90％，融合2天后，加含終濃度為0.5mmol/L IBMX、1umol/L DEX和終濃度為10 ug/ml的胰島素的10％胎牛血清高糖DMEM培養(yǎng)48h;48h后換含終濃度為10 ug/ml的胰島素的10％胎牛血清高糖DMEM再培養(yǎng)48h，48h后再換10％胎

4、牛血清高糖DMEM繼續(xù)培養(yǎng)，2天后換培養(yǎng)液一次，誘導(dǎo)分化8至12天前脂肪細(xì)胞3T3-L1大于90％呈現(xiàn)復(fù)脂滴為脂肪細(xì)胞，用油紅O染色鑒定后實(shí)驗(yàn)。
　　2.本研究采用Transwell技術(shù)，實(shí)驗(yàn)分三組，每組三個(gè)復(fù)孔，第一組為空白對(duì)照組(NC);第二組為巨噬細(xì)胞加黃芪多糖組(AM);第三組為脂肪細(xì)胞加黃芪多糖組(AF)。將巨噬細(xì)胞種于Transwell上室內(nèi)，將脂肪細(xì)胞種在下室內(nèi)，采用孔徑8μm的膜，上室中的巨噬細(xì)胞可穿過聚碳酸酯膜進(jìn)

5、入下室。前脂肪細(xì)胞3T3-L1誘導(dǎo)成為脂肪細(xì)胞后，將0.1 g/L的APS分別加入脂肪細(xì)胞培養(yǎng)液和巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液作為干預(yù)因素，空白對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)液不加APS;48小時(shí)后取出小室，去除培養(yǎng)液，擦拭聚碳酸酯膜上面的巨噬細(xì)胞，4％的多聚甲醛室溫固定30分鐘后，結(jié)晶紫染色30分鐘后，通過倒置顯微鏡計(jì)數(shù)上室底部細(xì)胞數(shù)量檢測細(xì)胞趨化;再收集每組Transwell上下室中的培養(yǎng)液進(jìn)行酶聯(lián)免疫試劑法(ELlSA)檢測，檢測其中IL-6、TNT-α細(xì)胞因

6、子的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.通過雞尾酒方案成功誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化，采用油紅O染色進(jìn)行鑒定。
　　2.Transwell計(jì)數(shù)，NC組、AM組與AF組比較， AF組巨噬細(xì)胞趨化至下室的細(xì)胞數(shù)量顯著低于NC和AM組，與AM組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.ELISA檢測結(jié)果顯示:①IL-6: NC組與AF組的下室比較，IL-6的濃度降低(P＜0.05);NC組與AF組的上室、NC組與AM組的上室、