雌二醇聯(lián)合UVB照射對(duì)表皮中黑素小體代謝的影響.pdf

1、背景：臨床上黃褐斑等色素增加性皮膚病很多見(jiàn)，目前治療措施有限，治療效果欠佳，復(fù)發(fā)率高。引起皮膚色素沉著的原因很多且非常復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制也尚未明確。進(jìn)一步明確其病因和發(fā)病機(jī)制,對(duì)探尋更好的治療方法，提高療效，降低復(fù)發(fā)率有很大幫助，目前研究發(fā)現(xiàn)黃褐斑患者皮損中雌激素受體表達(dá)增多，UVB照射能通過(guò)提高黑素細(xì)胞的分裂增殖能力來(lái)促使黑素合成增多，并能加強(qiáng)黑素細(xì)胞的胞吐作用來(lái)增進(jìn)黑素轉(zhuǎn)運(yùn)，但UVB與雌激素聯(lián)合作用對(duì)黑素細(xì)胞的影響尚不明確。本研究通過(guò)建

2、立合適的體外模型來(lái)探討UVB照射與雌激素聯(lián)合作用在皮膚色素增加性皮膚病中的作用。
　　目的：通過(guò)體外創(chuàng)建角質(zhì)形成細(xì)胞與黑素細(xì)胞的共培養(yǎng)體系以及豚鼠動(dòng)物模型來(lái)研究不同濃度的雌二醇、UVB輻射對(duì)表皮細(xì)胞內(nèi)黑素小體代謝過(guò)程的影響，探討雌二醇和UVB在黃褐斑發(fā)病機(jī)制中所發(fā)揮的作用。
　　方法：1.通過(guò)利用新鮮的包皮組織培養(yǎng)人原代黑素細(xì)胞，復(fù)蘇液氮罐中的人永生化表皮角質(zhì)形成細(xì)胞株，經(jīng)過(guò)細(xì)胞換液和傳代等步驟，培養(yǎng)出擁有良好生物活性的對(duì)數(shù)

3、生長(zhǎng)期細(xì)胞。利用上述細(xì)胞建立起體外HaCaT細(xì)胞和黑素細(xì)胞的共培養(yǎng)體系，借助倒置顯微鏡和免疫組織化學(xué)技術(shù)來(lái)觀察體系中共培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化和生長(zhǎng)情況等。共培養(yǎng)細(xì)胞予以不同濃度雌二醇結(jié)合UVB照射處理。實(shí)驗(yàn)設(shè)立空白對(duì)照組，DMSO對(duì)照組，UVB照射組，雌二醇處理組和雌二醇結(jié)合UVB照射組（雌二醇+UVB組），雌二醇濃度設(shè)為10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L,UVB照射劑量統(tǒng)一為20mJ/cm2。上述處理后采用MDC

4、染色測(cè)定共培養(yǎng)體系中HaCaT細(xì)胞的自噬程度。2.選取健康花色豚鼠，同樣設(shè)立溶媒對(duì)照組，UVB照射組，雌二醇處理組和雌二醇結(jié)合 UVB照射組（雌二醇+UVB組）；其中雌二醇濃度設(shè)為3.67×10-5mol/L、3.67×10-4mol/L、3.67×10-3mol/L；UVB照射劑量統(tǒng)一為500mJ/cm2。經(jīng)豚鼠背部棕色皮毛區(qū)，進(jìn)行外涂一定濃度的雌二醇溶液以及UVB照射處理，通過(guò)比較處理前后肉眼照片和皮膚顏色測(cè)量值，采用透射電子顯微鏡

5、和皮膚在體共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM，簡(jiǎn)稱皮膚CT）等方法觀察雌二醇及UVB照射對(duì)豚鼠背部皮膚色素沉著的影響，從而探討雌二醇和UVB在黑素小體合成及降解過(guò)程中可能發(fā)揮的作用。
　　結(jié)果：1.體外單獨(dú)培養(yǎng)的人黑素細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞活性良好，生長(zhǎng)狀態(tài)佳。在兩者所建立的共培養(yǎng)體系中，HaCaT細(xì)胞與黑素細(xì)胞的比例隨時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯增高（P<0.05）。MDC染色結(jié)果顯示：經(jīng)一定濃度雌二醇和一定劑量UVB照射處理后與空白對(duì)照組相比，

6、自噬體陽(yáng)性細(xì)胞比率未見(jiàn)明顯改變（P>0.05），統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)差異。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中一定濃度的雌二醇可加深豚鼠皮膚色素沉著，且隨著雌二醇濃度的遞增，色素沉著程度逐漸加深（P<0.05）。UVB照射組豚鼠皮膚色素沉著較未照射組明顯增加（P<0.05）。UVB照射后豚鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中自噬體增加，而經(jīng)雌二醇處理后其減少。
　　結(jié)論：1.人黑素細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞共培養(yǎng)體系中，一定濃度雌二醇和一定劑量UVB照射處理均未能引起HaCaT細(xì)胞自噬