核質(zhì)重組胚基因組重序過(guò)程中TBP的動(dòng)力學(xué)變化研究.pdf

1、　　核質(zhì)重組胚在發(fā)生正確的后生重序后可以重新獲得發(fā)育的潛能。體細(xì)胞特有的后生修飾標(biāo)記在這一重序過(guò)程中被去除。本實(shí)驗(yàn)以表達(dá)EGFP-TBP的NIH3T3細(xì)胞為供體，去核MⅡ期小鼠卵母細(xì)胞為受體，構(gòu)造核質(zhì)重組胚，研究了TBP在重組胚核后生重序過(guò)程中的動(dòng)力學(xué)變化，結(jié)果表明： 1.間接免疫熒光試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TBP集中分布于NIH3T3細(xì)胞間期細(xì)胞核中，但在中期染色體未見(jiàn)TBP免疫熒光。然而，采用EGFP-TBP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞發(fā)

2、現(xiàn)，TBP-GFP融合蛋白不僅集中在間期細(xì)胞核中，而且也存在于中期染色體上；雖然中期染色體上的熒光強(qiáng)度只有間期核的16﹪，但可見(jiàn)TBP顯著地殘留在濃縮的中期染色體上。 2.在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程中，間接免疫熒光試驗(yàn)在GⅤ期卵子的細(xì)胞核中檢測(cè)到TBP的集中分布，但在MⅠ、MⅡ期的染色體上未能檢測(cè)到TBP熒光。 3.表達(dá)EGFP-TBP融合蛋白的NIH3T3細(xì)胞作為細(xì)胞核供體用于核移植，在與去核卵母細(xì)胞融合2小時(shí)后，體細(xì)胞核