大豆異黃酮對(duì)男（雄）性精液質(zhì)量及性激素水平的影響.pdf

1、目的：
　　通過對(duì)重慶地區(qū)普通成年男性流行病學(xué)調(diào)查及實(shí)驗(yàn)室檢測，了解該地區(qū)成年男性大豆異黃酮內(nèi)暴露水平，明確大豆異黃酮內(nèi)暴露水平與男性精液質(zhì)量和性激素水平之間的關(guān)聯(lián)。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究探討不同劑量下的大豆異黃酮代謝物對(duì)血清性激素水平及精液質(zhì)量的影響。為探討大豆異黃酮對(duì)男性生殖健康的不良影響提供參考依據(jù)。
　　方法：
　　1、人群研究：研究對(duì)象為2015年在重慶市豐都縣社區(qū)招募的普通成年男性，通過復(fù)合式問卷收集研究對(duì)象的基

2、本信息，現(xiàn)場采集志愿者的血液、尿液及精液樣本。采用高效液相色譜(High performance liquid chromatography,HPLC)分析人群尿液大豆異黃酮代謝物水平，計(jì)算機(jī)輔助精子分析系統(tǒng)(Computer-aided sperm analyzer,CASA)進(jìn)行精液參數(shù)分析，Diff-Quick試劑盒染色檢測精子形態(tài)，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析法（Sperm chromatin structure assay,SCSA）檢測精

3、子核DNA碎片指數(shù)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測定精子線粒體DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)拷貝數(shù)，長鏈PCR方法檢測mtDNA完整性，化學(xué)發(fā)光法檢測人群血清性激素水平（睪酮、卵泡刺激素、黃體生成素、雌二醇、孕酮、泌乳素）。采用SPSS16.0軟件分析了大豆異黃酮尿代謝物水平與精液質(zhì)量及性激素水平之間的關(guān)聯(lián)。研究對(duì)象的納入標(biāo)準(zhǔn)為：
　?、俳鞌?shù)為2～7天；
　?、谀挲g18~55周歲男性；
　?、蹮o

4、泌尿系統(tǒng)感染史、附睪炎病史、睪丸損傷疾病史、精索靜脈曲張治療史、睪丸下降不全史；
　?、軣o喉結(jié)、陰毛、乳腺發(fā)育異常、陰莖異常、睪丸損傷、附睪炎癥、精索靜脈曲張、隱睪術(shù)后；
　　⑤無五項(xiàng)精液參數(shù)均缺失者；
　?、弈蚣◆–reatinine，CR）濃度在0.3~3g/L。最終納入161例作為研究對(duì)象。
　　2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究：采用60只4周齡（青春期）SD雄性大鼠進(jìn)行亞慢性染毒，隨機(jī)分為6組，分別是正常對(duì)照組、染料木

5、素5mg/kg、50mg/kg、500 mg/kg和2000mg/kg組、陽性對(duì)照己烯雌酚0.1mg/kg組，連續(xù)灌胃29天。分別在染毒結(jié)束時(shí)（8周齡）以及動(dòng)物成年后（11周齡）進(jìn)行取材，觀察指標(biāo)包括臟器系數(shù)、睪丸組織結(jié)構(gòu)、性激素水平及精液質(zhì)量。采用蛋白質(zhì)印跡（Western blot,WB）檢測睪丸ERβ的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、人群研究：本次研究檢測了人群尿液染料木素、大豆苷元，黃豆黃素，雌馬酚，二氫大豆苷元代謝

6、物水平。Jonckheere-Terpstra檢驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著總的大豆異黃酮濃度等級(jí)的增加，精液體積和精子密度呈現(xiàn)遞減趨勢，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.044和0.018），隨著雌馬酚水平的增加，精液體積呈增加的趨勢（p=0.034）。在性激素水平上，染料木素與黃體生成素（p=0.019），黃豆黃素與睪酮（p﹤0.001），二氫大豆苷元與孕酮（p=0.021）均呈負(fù)相關(guān)。采用多元線性回歸方法校正潛在混雜因素（年齡、體質(zhì)指數(shù)、禁欲天數(shù)、吸

7、煙狀態(tài)、飲酒狀態(tài)）后，大豆異黃酮尿代謝物水平與上述精液參數(shù)關(guān)聯(lián)消失，與性激素水平關(guān)聯(lián)依舊存在。本研究未發(fā)現(xiàn)大豆異黃酮與DNA損傷指標(biāo)（DNA碎片指數(shù)，mtDNA拷貝數(shù)，mtDNA完整性）之間存在關(guān)聯(lián)。此外多元線性回歸結(jié)果顯示，精子DNA損傷指標(biāo)與精液質(zhì)量之間存在關(guān)聯(lián)。
　　2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究：大鼠青春期攝入染料木素后，染毒結(jié)束時(shí)及成年期染料木素各劑量組大鼠體重及臟器系數(shù)較正常對(duì)照組比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HE染色結(jié)果顯示染毒結(jié)束時(shí)染料

8、木素2000mg/kg組睪丸組織生精小管細(xì)胞管腔中細(xì)胞稀疏，排列紊亂，成年期染料木素2000mg/kg組大鼠生精小管管腔內(nèi)精子數(shù)量較正常對(duì)照組比減少，其余各染料木素劑量組睪丸組織形態(tài)無明顯病理學(xué)改變。性激素檢測表明，染毒結(jié)束時(shí)染料木素5mg/kg和50mg/kg劑量組的血清雌二醇水平較正常對(duì)照組比降低（p﹤0.05），染料木素50mg/kg劑量組的血清卵泡刺激素和睪酮水平升高（p﹤0.05）；染料木素2000mg/kg劑量組在染毒結(jié)束時(shí)

9、未觀察到激素水平的改變，但到達(dá)成年期時(shí)其雌二醇濃度升高，睪酮濃度降低（p﹤0.05）。精液質(zhì)量分析發(fā)現(xiàn)，染料木素2000mg/kg劑量組大鼠在成年期出現(xiàn)精子密度和精子總數(shù)的降低（p﹤0.05）。此外，染毒結(jié)束時(shí)染料木素各劑量組的睪丸ERβ表達(dá)未出現(xiàn)明顯改變，但成年期大鼠睪丸β-雌激素受體（Estrogenreceptor-β,Erβ）的表達(dá)水平隨著染料木素劑量的增高而增高。
　　結(jié)論：
　　人群結(jié)果提示，正常膳食攝入大豆異黃