甲狀旁腺激素1-34對(duì)內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)誘導(dǎo)DH豚鼠膝關(guān)節(jié)退變的潛在保護(hù)作用及其作用機(jī)制.pdf

1、第一部分內(nèi)側(cè)半月板切除對(duì)DH豚鼠膝關(guān)節(jié)軟骨作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：對(duì)內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)（medial menescectomy，MNX）誘導(dǎo)Dunkin Hartley（DH）豚鼠關(guān)節(jié)退變模型進(jìn)行組織學(xué)評(píng)估，對(duì)其反映的骨關(guān)節(jié)炎發(fā)展階段進(jìn)行定性。
　　方法：
　　13月齡雄性DH豚鼠12只，隨機(jī)將動(dòng)物分為2組（n=6）：Sham組和MNX組，分別行假手術(shù)和內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)。
　　2所有動(dòng)物術(shù)后飼養(yǎng)12周處死，利用O

2、ARSI關(guān)節(jié)評(píng)分系統(tǒng)對(duì)關(guān)節(jié)退變情況進(jìn)行評(píng)估，利用免疫組化技術(shù)對(duì)軟骨組織中OA相關(guān)因子表達(dá)水平進(jìn)行分析，利用ELISA技術(shù)對(duì)血清中IL-1β濃度進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果：1兩組動(dòng)物體重隨時(shí)間逐漸增長(zhǎng)，各時(shí)間點(diǎn)兩組間體重?zé)o顯著差異；2兩組動(dòng)物血清中IL-1β濃度無(wú)顯著差異；3 MNX組動(dòng)物術(shù)后關(guān)節(jié)退變嚴(yán)重，內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)負(fù)重區(qū)軟骨厚度明顯減少（P<0.05）。OARSI評(píng)分顯示MNX組總分及CS、PG、CL和OST子項(xiàng)評(píng)分均顯著高于Sham

3、組（P<0.05）；4 MNX組軟骨基質(zhì)中AGG表達(dá)水平顯著低于Sham組，MMP-13、ADAMTS4和Caspase-3表達(dá)水平顯著高于Sham組（P<0.05）。AGG/ADAMTS4比例和Col-II/MMP-13比例均顯著低于Sham組，而其Col-II/AGG比例則顯著高于Sham組（P<0.05）。
　　第二部分甲狀旁腺激素(1-34)對(duì)MNX誘導(dǎo)DH豚鼠膝關(guān)節(jié)退變軟骨潛在作用的研究
　　目的：以塞來(lái)昔布（ce

4、lecoxib，CLX）作為陽(yáng)性對(duì)照，研究甲狀旁腺激素(1-34)（parathyroid hormone(1-34)，PTH(1-34)）對(duì)MNX誘導(dǎo)DH豚鼠膝關(guān)節(jié)退變模型的作用，比較二者對(duì)這一早期OA模型的作用。
　　方法：
　　13月齡雄性Dunkin Hartely豚鼠24只，隨機(jī)將動(dòng)物分為4組（n=6）：Sham組、MNX+NS組、MNX+CLX組和MNX+PTH組，分別行假手術(shù)和內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)。
　　2對(duì)

5、所有動(dòng)物進(jìn)行為期12周的治療，MNX+PTH組皮下注射給予PTH(1-34)，24μg/kg，每周給藥5天；MNX+CLX組灌胃給予CLX，20mg/kg，每日給藥；Sham組灌胃給予等量生理鹽水。
　　3所有動(dòng)物處死后，利用OARSI關(guān)節(jié)評(píng)分系統(tǒng)對(duì)關(guān)節(jié)退變情況進(jìn)行評(píng)估，利用免疫組化技術(shù)對(duì)軟骨組織中 OA相關(guān)因子表達(dá)水平進(jìn)行分析，利用ELISA技術(shù)對(duì)血清中IL-1β濃度進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果：14組動(dòng)物體重隨時(shí)間逐漸增長(zhǎng)，各時(shí)

6、間點(diǎn)各組間體重?zé)o顯著差異；2各組動(dòng)物血清中IL-1β濃度無(wú)顯著差異；3 MNX+NS組動(dòng)物術(shù)后關(guān)節(jié)退變嚴(yán)重，內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)負(fù)重區(qū)軟骨厚度較 Sham組明顯減少， MNX+CLX組軟骨厚度顯著高于MNX+NS組，MNX+PTH組軟骨厚度顯著高于MNX+CLX組和MNX+NS組（P<0.05）。OARSI關(guān)節(jié)評(píng)分顯示MNX+CLX組和MNX+PTH組的總分及CS和PG子項(xiàng)評(píng)分均分別顯著低于MNX+NS組（P<0.05）；4）MNX+NS組AG

7、G表達(dá)水平顯著低于Sham組，MMP-13、ADAMTS4、Caspase-3和Periostin表達(dá)水平顯著高于Sham組（P<0.05）。MNX+CLX組ADAMTS4和Periostin表達(dá)水平顯著低于MNX+NS組（P<0.05）。MNX+PTH組AGG表達(dá)水平顯著高于MNX+NS組和MNX+CLX組，ADAMTS4、Caspase-3、MMP-13和Periostin表達(dá)水平顯著低于 MNX+NS組（ P<0.05）。AGG/

8、ADAMTS4比例和Col-II/MMP-13比例較Sham組顯著降低，Col-II/AGG比例較Sham組顯著增高（P<0.05）。MNX+PTH組AGG/ADAMTS4比例顯著高于MNX+NS組， Col-II/MMP-13比例顯著高于 MNX+NS組和 MNX+CLX組， Col-II/AGG比例顯著低于MNX+NS組（P<0.05）。
　　第三部分 PTH(1-34)對(duì)內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)誘導(dǎo)DH豚鼠膝關(guān)節(jié)退變軟骨下骨潛在作用

9、的研究
　　目的：以 CLX作為陽(yáng)性對(duì)照觀察 PTH(1-34)對(duì)該模型軟骨下骨的作用，進(jìn)一步研究PTH(1-34)對(duì)該模型關(guān)節(jié)軟骨保護(hù)作用的機(jī)制。
　　方法：
　　13月齡雄性Dunkin Hartely豚鼠24只，隨機(jī)將動(dòng)物分為4組（n=6）：Sham組、MNX+NS組、MNX+CLX組和MNX+PTH組，分別行假手術(shù)和內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)。
　　2對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行為期12周的治療，MNX+PTH組皮下注射給予PT

10、H(1-34)，24μg/kg，每周給藥5天；MNX+CLX組灌胃給予CLX，20mg/kg，每日給藥；Sham組灌胃給予等量生理鹽水。
　　3所有動(dòng)物處死后，利用 MicroCT技術(shù)測(cè)定內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)負(fù)重區(qū)軟骨下骨的BMD以及BV/TV、Tb.N、Tb.Sp、Tb.Th、SMI和DA等參數(shù)。
　　結(jié)果：骨密度結(jié)果顯示 MNX+NS組的 BMD顯著低于 Sham組， MNX+PTH組的BMD顯著高于MNX+NS組（P<0.05

11、）。骨形態(tài)參數(shù)分析結(jié)果顯示MNX+NS組軟骨下骨BV/TV和Tb.Th顯著低于Sham組，而Tb.Sp與SMI顯著高于Sham組（P<0.05）。MNX+CLX組上述參數(shù)結(jié)果與MNX+NS組相比未見(jiàn)顯著差異，但MNX+PTH組上述參數(shù)結(jié)果均得到不同程度的恢復(fù)（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)可導(dǎo)致 DH豚鼠術(shù)側(cè)膝內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)在術(shù)后12周內(nèi)快速退變，其軟骨組織和軟骨下骨改變提示這一關(guān)節(jié)退變模型是一種反映早期